人类血小板同种抗原研究进展

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1、人类血小板同种抗原研究进展【摘要】　　人类血小板同种抗原（humanplateletalloantigens,HPA）是由血小板糖蛋白携带的一类特异性抗原，其基因具有单核苷酸多态性（SNP）。HPA可介导同种抗体的产生，引起同种免疫反应，与输血后血小板减少性紫癜（PTP）、血小板输注无效（PTR），新生儿同种免疫血小板减少性紫癜（NAITP）及移植排斥密切相关。因其在临床输血实践及相关疾病中的重要作用，而备受关注。本文就HPA抗原的命名、血小板糖蛋白多态性、HPA检测方法、血小板同种免疫反应机制以及相关疾病研究进展作一综述。【关键词】HPA;血小板糖蛋白复合物多态性;检测方法　　Adv

2、ancesintheStudiesonHumanPlateletAlloantigen——Revieanplateletalloantigens(HPA)arespecificantigenscarriedbyplateletglycoprotEins,orphism.HPAcaninducealloantibodiesbringingaboutalloimmuneresponse.Theyplayimportantrolesinpost-transfusionrefractorinesstoplatelets,post-transfusionthrombocytopenicpurpu

3、ra,fetomaternalalloimmunethrombocytopenia,andgraft-versus-hostdisease.BecauseofthEIrsideeffectsinclinicalblood-transfusion,thereenclatureofHPA,thepolymorphismsofplateletglycoproteins,HPAtypingoftheserologicalandmoleculartechnology,asechanismofalloimmunizationtoHPAandcorrelateddiseases.　　Keyorphi

4、sms;detectionmethod　　人类血小板同种抗原（humanplateletalloantigen,HPA）是分布在血小板糖蛋白上一类特异性抗原，又称血小板特异性抗原。在目前已检测出的24个HPA抗原中,除HPA-14b等［3］在多次输血的妇女血清中，发现Zanplateletalloantigens（略）　　糖蛋白GPⅠb/V/Ⅸ复合物多态性　　糖蛋白GPⅠb/V/Ⅸ复合物(CD42,von-etcalfe等［15］首次运用序列特异性引物PCR成功地对HPA-1进行分型。SSP-PCR的原理：设计特异性引物，利用引物3'端的特异性，直接扩增相应的HPA片段，PCR产物凝胶

5、电泳以后，以紫外线透射来检测，DNA条带的存在或缺失即可确定基因型。特点：SSP-PCR操作比较简单，耗时较少，适合小批量标本，是目前HPA基因定型中最常用的一种技术。　　实时定量PCR（real-timequantitativePCR）实时定量PCR原理：在PCR指数扩增期间，利用连续监测荧光信号的强弱来即时测定特异性产物的量，并据此推断目的基因的初始量［16］。它广泛应用于定量检测mRAN表达水平，其特点是易操作、高通量、敏感性高和特异性强。最近，Ficko等［17］运用实时定量PCR技术分析了血小板糖蛋白GP-Ⅲa基因的表达。TaqManTM技术是美国PerkinElmer公司研

6、制的一种实时PCR技术［18］,它利用了Taq多聚酶的核酸酶活性。Taq酶在引物延伸过程中，特异性移去杂交的探针，利用其5′核酸酶活性将探针劈开，释放出指示荧光染料，指示染料的荧光强度随着每一个扩增循环而增加。这一方法成功运用于HPA-1、-2和-3基因定型［19］。2000年，美国AppliedBiosystems公司开发了一种新的TaqMan-MGB［20］，进一步加强了TaqmanSNP检测的能力。　　基因芯片技术（DNAmicroarray）基因芯片技术利用正向杂交的方法，制成针对HPA基因SNP位点的DNA芯片；用荧光标记的HPA型特异性探针分别与芯片进行杂交，用软件分析样品

7、的杂交结果，从而确定样品的HPA基因型。此技术特点是一次性可同时检测大量样品，快速，准确。近来，Brès［21］等用基因芯片对HPA-1等位基因系统分型，证明此方法适用于HPA基因分型。限制性片段长度多态性分析（PCR-RFLP）限制性片段长度多态性分析（RFLP）原理是：限制性内切酶能够识别DNA序列上的特异性位点，并切割产生一定长度的DNA片段。相关基因片断用含SNP区域的引物进行扩增，扩增产物用一种限制性酶进行降解，酶解的PCR产物进行聚