促红细胞生成素对脑缺血再灌注氧化损伤的实验研究

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1、浙江大学硕士学位论文促红细胞生成素对脑缺血再灌注氧化损伤的实验研究姓名：李中春申请学位级别：硕士专业：神经病学指导教师：陈怀红20040501促红细胞生成素对脑缺血再濯注氧化损伤保护作用的实验研究李中春陈怀红研究生导师【中文摘要】目的<11nF促红细胞生成素(Erythropoietin,EF0)是一种含唾液酸的酸性糖蛋白，传统上认为Epo是一种主要影响红细胞生成的体液因子，可以促进血祖细胞的增殖与分化。然而，近年来研究发现，中枢神经系统(CNS)中的星形胶质细胞可通过旁分泌方式分泌Epo,然后与附近神经元细胞膜上的Epo受体(Epo-R)结合，且对于CNS有保护作用，其机制除了可以

2、通过抑制神经毒性物质谷氨酸释矽，增加细胞钙内流，抑制NO的过度合成及阻止凋亡等多种机制外，也可能是通过减少了氧自由基的生成，从而减轻损伤引起的过氧化反应.本课题通过观察Epo对蒙古沙土鼠缺血再灌注脑组织中丙二醛(Malongldialdehyde,MDA)X超氧化物歧化酶(superoxidedismutase,SOD)含量的影晌，研究Epo是否对缺血再灌注脑损伤具有保护作用，并探索其可能的作材料与方法1•动物及分组:动物:健康成年蒙古沙土鬣40只，动物随机分为5组，每组8只。①假手术组：仅分离双侧颈总动脉而不阻断血流，然后逐层关闭切口，腹腔注射等量生理盐水。②对照组：制作沙土鼠脑缺

3、血再灌注模型，再灌注开始时即刻腹腔注射等量生理盐水③缺血Eg小剂量组(1500IU/kg,Epoi5组)④缺血Epo中剂量组(3000IU/kg,Epo30组)①缺血Epo大剂量组(6000IU/kg,Epo60组)③④⑤组于再灌注开始时即刻腹腔注射相应剂量用生理盐水稀释至加1的重组人促红细胞生成素。2.试剂与药物:MDA检测试剂盒,SOD检测试剂盒,重组人促红细胞生成素等。3•主要仪器：机械匀浆机，低温离心机，UV2755B型紫外可见光分光光度计等。4•方法：IIIIII建立沙土鼠脑缺血再灌注模型:水合氯醛腹腔注射麻醉后，做颈部正中切口，分离双侧颈总动脉，待动物清醒后，用无创微血管

4、夹嵌夹双侧颈总动脉，阻断血流lOmin,去除动脉夹并缝合切口制成蒙古沙土鼠全脑缺血再灌注模型。模型成功的标准：阻断双侧颈总动脉后，动物立刻出现呼吸加快，肢体痉挛,5〜60s之内昏迷，用止血钳夹其趾端无反应，放开微血管夹后，动物3min内清醒。不符合上述标准或症状过重者淘汰。脑缺血再灌注4h后，快速断头取脑，在生理盐水冰面上分离出幕上部分，制成10%的组织匀浆液，4C温度下离心取上清液进行脑匀浆MDA含量及SOD活力测定。5.统计方法：所有数据采用SAS6.12forwindows及SPSS11.0forwindowd统计软件包，统计方法采用成组设计单因素方差分析、LSD法多重比较及二

5、元定距变量的相关分析。结果沙土鼠脑缺血再灌注模型按照模型成功标准，蒙古沙土鼠全脑缺血再灌注模型成功率较高，稳定性好,单纯脑缺血再灌注组模型成功率72.7%.给药组82.8%o2、沙土鼠脑MDA含量的改变缺血再灌注后，脑匀浆MDA含量较假手术组显著升高(p<0,05),经rHu-Epo干预后各组MDA含量均较对照组降低(p<0.05),各组随剂量增加MDA含量逐渐下降，各组之间对比均有统计学意义(p<0.05)，三个给药组rHu-Epo剂量与脑组织匀浆MDA含量呈显著负相关("-0.851)，提示二者存在剂量-效应依赖关系。2、沙土鼠脑SOD含量的改变“Ki■■■r^nTTTTT^缺血

6、再灌注后，脑匀浆SOD活力下降(p<0.05)；rHu-Epo各治疗组SOD活力较对照组增加(p<0.05),EpoEO组较Epo30组SOD活力稍增加。但无统计学意义(p>0.05)，其它各给药组随剂量增加SOD活力增加(p«k05儿三个给药组rHu-Epo剂量与脑组织匀浆SOD活力呈显著正相关(尸0.B3)，提示二者呈明显的剂量-效应依赖关系。结论L氧自由基增加所导致的氧化损伤及氧化与抗氧化失衡直接参与了脑缺血再灌注损伤的病理过程。2.印。可以抗氧自由基，减轻沙土鼠脑缺血再灌注模型的细胞脂质过氧化橫伤,在一定程度上恢复损伤组织氧化与抗氧化平衡•对脑缺血再灌注氧化损伤有较明显的探护

7、作用。【关權词】蒙古沙土鼠促红细胞生成素脑缺血再灌注神经保护TheexperimentalstudyofErythropoietinprotectionagainstbrainischemicreperfusionoxidationinjuryMedicalCollegeofZhejiangUniversityPostgraduateLiZhongchunSupervisorChengHuaihongAbstractObjectiveErythropoie