基因治疗的策略

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1、基因治疗的策略？答：1、基因置换或称基因矫正：特定的冃的棊因导入特定的细胞，通过定位重组，让导入的正常基因迸换基因组内原有的缺陷基因，不涉及基因组的任何改变。2.基因添加：通过导入外源基因使靶细胞表达其本身不表达的基因。3.基因干预：采用特定的方式抑制某个基因的表达，或者通过破坏某个基因的结构而使Z不能表达，以达到治疗疾病的目的。4.自人杀基因治疗：将“自八杀”基因导入宿主细胞中，这种基因编码的酚能使无毒性的药物丽体转化为细胞毒性代谢物，诱导靶细胞产牛“自八杀”效应。PCR的基本原理？答：PCR是在试管屮进行的DNA复制反应，基木原理

2、是依据细胞内DNA半保留复制的机理，以及体外DNA分子于不同温度下双链和单链可以互和转变的性质，人为地控制体外合成系统的温度，以促使双链DNA变成单链，单链DNA与人工合成的引物退火，然后耐热DNA聚合酶以dNTP为原料使引物沿着单链模板延伸为双链DNAoPCR全过程每一步的转换是通过温度的改变來控制的。需要重复进行DNA模板解链、引物与模板DNA结合、DNA聚合晦催化新生DNA的合成，即高温变性、低温退火、中温延伸3个步骤构成PCR反应的一个循环，此循环的反复进行，就可使目的DNA得以迅速扩增。DNA模板变性：模板双链DNA?单链D

3、NA,94°C。退火：引物+单链DNA?杂交链,引物的Tm值。引物的延伸:温度至70°C左右，TaqDNA聚合酶以4种dNTP为原料，以目的DNA为模板，催化以引物3，末端为起点的5,->3,DNA链延仲反应，形成新生DNA链。新合成的引物延仲链经过变性后又可作为下-•轮循环反应的模板PCR,就是如此反复循环，使F1的DNA得到高效快速扩增。本章的主要内容：基因表达调控的基本概念、特点、基本原理。乳糖操纵子的结构、负性调控、止性调控、协调调节、转录衰减、SOS反应。真核基因及基因表达调控的特点、顺式作用元件和反式作用因子的概念、种类和

4、特点.以及它们在转录激活小的作用。本章的要点：第一节基因表达调控基本概念与原理一、基因表达的概念基因是一段DNA分了，编码一种多肽链或RNA。基因通过转录和翻译产生具冇一定功能的蛋白质的过程。人多数基因的表达产物是蛋白质，部分基因如「RNA和tRNA基因的表达产物是RNA.二、基因表达的特点（A）时间特异性或发冇阶段特异性、（B）空间特异性或组织细胞特异性，（C）有两种表达方式，管家基因儿乎在所有的细胞和所有的发育阶段持续表达，基本不受环境因素的影响，只受启动子调节。另外一些基因的表达受环境因素的诱导或阻遏。（D）基因表达可在多层次上

5、受到调节如基因、转录、转录后加工翻译和翻译麻加工等水平上进行调节。但最主要的是转录水平的调节，本章讨论的内容是原核基因和真核基因转录水平的调节。三、基因转录激活的基本要素（A）特异的DNA调节序列是调节基因转录的DNA片段，如原核生物操纵了调控区中的启动序列、操纵序列、CAP蛋口结合位点和真核基因的启动子、增强子和沉默子等。（B）调节蛋白是调节基因转录的蛋白因子，如原核生物的阻遏蛋白和CAp蛋白、真核生物的基本转录因子和特界转录因子等。（C）RNA聚合陆是催化基因转录最主要的酶。原核生物只冇一种RNA聚合酶，催化所冇RNA的转录。真核

6、生物冇三种RNA聚合酶,催化不同RNA的转录。DNA调节元件和调节蛋口町以通过影响RNA聚合酶的活性来调接基因转录激活。第二节原核基因转录调控一原核基因表达调节的特点：（A）O因子决定RNA聚合酚识别特异性，帮助RNA聚合酶识别不同启动子，对不同基因进行转录。（B）转录调节普遍釆川操纵子模式，原核牛•物功能相关的基因往往串联地排列在一起，在一个共同的调控区的调节下，一起转录生成一个多顺反子，最终表达产物是一些功能相关的酶或蛋白质，它们一起参与某种底物的代谢或某种产物的合成。（C）阻遏蛋口对转录的抑制作用是普遍存在的贡性调节。二、乳糖操

7、纵子的结构、负性和正性调节及协调调节（A）乳糖操纵子包括三个结构基因（Z、Y、A）三个调节序列：启动序列、操纵序列和CAP蛋口结合位点，以及一个调节基因，调节基因编码阻遏蛋口。（B）、阻遏蛋白的负性调节蛋口质与DNA结合抑制基因的转录属于负性调节。操纵序列是控制操纵子屮结构基因转录的开关，阻遏蛋白与操纵序列结合可阻止RNA聚合酶对结构基因的转录。当乳糖存在时，乳糖的分鲜产物半乳糖与阻遏蛋口结合，导致阻遏蛋白与操纵序列解离，诱导基因的转录。（C）CAP的正性调节蛋白质与DNA结合增强基I大I转录属于正性调节。在启动了上游子存在CAP结合

8、位点，CAP与其结合后可促进RNA聚合酶与启动秀列结合，从而促进转录。但是,CAP单独不能与其位点结合，只有与CAMP形成复合物后才能与CAP位点结合。细胞内葡萄糖缺乏时，CAMP水平升高，CAMP—CAP复合物形成并与