肿瘤基因治疗的基本策略和常用方法ppt课件

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1、肿瘤基因治疗的基本策略和常用方法临五1604张湘钰邹颖CONTENTS01肿瘤和基因治疗的基本概念02肿瘤基因治疗的基本策略03基本方法04对未来肿瘤基因治疗的展望肿瘤基因治疗的基本策略和常用方法01肿瘤和基因治疗的基本概念01肿瘤机体在各种致癌因素作用下，局部组织的某一个细胞在基因水平上失去对其生长的正常调控，导致其克隆性异常增生而形成的异常病变。学界一般将肿瘤分为良性和恶性两大类。01基因治疗指将外源正常基因导入靶细胞，以纠正或补偿因基因缺陷和异常引起的疾病，以达到治疗目的，肿瘤的基因治疗是将目的基因导入靶细胞,使其在体内表达并发挥特定的功能,杀伤或抑制肿瘤细胞从

2、而达到治疗的目的02肿瘤基因治疗的基本策略01020304采用基因打靶技术矫正突变的抑癌基因中的突变序列基因矫正01将外源性的正常抑癌基因直接导入肿瘤细胞，取代突变的抑癌基因而发挥作用，以改变肿瘤细胞的恶性表型基因置换02利用基因干扰技术等抑制异常表达的癌基因或肿瘤相关基因，降低其表达活性或使其不表达03基因失活GO!YEAH!基因修饰04又称基因转移，是指将外源性目的基因导入癌变细胞，通过目的基因表达产物修饰缺陷细胞，使其恢复功能或原有功能得到加强基因型修饰是应用最广泛的一个策略。03常用方法0104031、基因干预技术2、自杀基因治疗3、肿瘤的免疫基因治疗4、提高

3、化学治疗效果的辅助基因治疗021、基因干预技术（1）反义RNA技术如何获得反义RNA：①体外构建反义RNA表达载体，将其导入肿瘤细胞并表达反义RNA②体外合成反义RNA，将其导入靶细胞，对表达异常的癌细胞产生抑制效应。1、基因干预技术反义RNA技术在基因治疗中需解决的首要问题：①专一性转移问题：如何专一性的对病灶处病变的细胞进行处理，而不影响其它正常细胞②反义RNA在进入靶细胞前的降解问题：反义RNA抗RNase的能力不强③安全性问题1、基因干预技术受体介导反义RNA转移技术受体介导的细胞吞噬作用：细胞膜上存在一些专一性受体是组织或器官特异的，这些受体专一性的与相应配

4、体结合后，所形成的受体配体复合物就会在细胞膜上某些特定区域富集，通过细胞吞噬作用，实现这些配体向细胞内的转移特点：①具有细胞、组织或器官专一性，配体只能被一些特异的细胞吞噬②配体进入细胞的转移效率很高脱唾液酸血清类黏蛋白（ASGP）受体介导反义RNA转移1、基因干预技术反义DNA技术治疗肿瘤的三个设想：①封闭异常表达的癌基因②癌基因的异位和重排部位是反义RNA治疗的理想目标③抑制肿瘤细胞耐药性，从而提高化学治疗效果1、基因干预技术⑵、RNA干扰技术RNA干扰(RNAinterference,RNAi)是指在进化过程中高度保守的,由双链RNA(dsRNA)诱发、同源mR

5、NA高效特异性降解的现象。RNAi使特定基因沉默,是真核细胞中的一种转录调节机制,这种由21~23个核苷酸长度介导的小RNA常被称为小干扰RNA(siRNA),其序列在真核生物进化中高度保守。将长dsRNA或短siRNA递送进入生物体细胞内均可引发RNAi，进而使特定基因表达沉默基于RNAi的肿瘤治疗应用于临床,有两个关键问题亟需解决:首先,如何高效向肿瘤细胞或组织递送干扰RNA;其次,如何减少外源性siRNA引起的不良反应。1、基因干预技术RNAi作用机制①病毒基因、转座子、人工转入基因等外源基因随机整合到宿主细胞基因组内,并利用宿主细胞进行转录时常产生一些dsRN

6、A。②siRNA在细胞内RNA解旋酶的作用下解链成正义链和反义链,然后由反义链与胞内一些酶(包括内切酶、外切酶、解旋酶等)结合形成RNA诱导的沉默复合物（RISC）③此时RISC具有核酸酶的功能,能在结合部位切割mRNA,切割位点是与siRNA中反义链互补结合的两端。被切割后的断裂mRNA随即降解,进而诱发宿主细胞针对这些mRNA的降解反应1、基因干预技术RNAi理想递送系统①适配体——RNAi的嵌合体。适配体能与多种目标物质高特异性、高选择性结合②稳定核酸脂质复合物（SNALPs），对脂类复合物进行聚乙二醇（PEG）修饰使得复合物获得亲水性外层，从而增强其在血浆中的

7、稳定性如何高效地向肿瘤细胞或组织递送干扰RNA?1、基因干预治疗如何解决RNAi存在的安全问题?1、克服siRNA的脱靶问题siRNA可引起一些非靶基因的特异性沉默或表达上调，引起细胞凋亡或生长抑制，这种现象叫做脱靶效应解决脱靶效应的潜在方法：⑴最新发现的siRNA领域转移优化策略⑵改变siRNA浓度⑶siRNA设计2、克服RNAi引起的免疫反应siRNAs是哺乳动物固有免疫系统的有力激活剂，能诱导产生高水平的炎性细胞因子和Ⅰ型干扰素。解决方法：⑴用免疫刺激的siRNA来避免诱发的相关免疫反应，通过选择免疫缺乏刺激基序的序列，设计出无免疫刺激活性的s