米糠多糖的提取研究

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1、米糠多糖的提取研究米糠多糖(RiceBrainpolysaccharide,RBP)存在于稻谷的颖果皮层里，主要是指分子量不等的一类非淀粉多糖。采用不同的提取工艺会得到不同的米糠多糖组分。米糠多糖具有广泛的生理活性，在抗肿瘤，增强免疫力，降血糖，降脂方面有显著效果。多糖捉取的方法冇微波浸提法，热水蒸煮法，超声浸提法等。实验中比较了不同去除杂质方法对所得米糠多糖含最的比较，同时也对3种多糖提取方法在米糠多糖的提取屮所得的多糖含量进行了比较。选取较优的微波提取法，并对其提取工艺参数进行了进一步优化。1.米糠多糖的提取实验材料米糠：无锡秦良商贸有限公司耐髙温a-淀粉酶：无锡

2、酶制剂厂，20000IU/g试剂：无水乙醇、石油瞇、三氯乙酸、盐酸均为分析纯，购口国药集团化学试剂有限公司。1.2仪器722型可见光分光光度计；LD4-2A型台式离心机；Panasonic微波炉；真空冷冻干燥机。1.3实验方法1.3.1米糠样品的前处理将米糠用石油醯按1：3比例脱脂1小时，重复3次，自然十燥。1・3・2用改进的硫酸.苯酚法测米糠多糖含量1.3.2.1显色剂的制备将50讥浓硫酸缓缓加入10mL水中，冷却至室温，加入0.6g苯酚品体搅拌使其溶解配成显色液。1.322硫酸•苯酚法测米糠多糖含量取LOOmL稀释一定倍数的糖液于试管中加入5.00mL显色液振荡混

3、匀；取1.00mL蒸徭水于试管屮加入5.00mL显色液振荡混匀，得到参比溶液。将标准溶液和参比溶液置于沸水浴屮保温3()〜35min,取出示放在冷水浴屮冷却至室温，于49()nm波长处测定其吸光值。传统的硫酸■苯酚测糖法的操作过程是：取1.00mL样品加l.OOmL水，加1.00mL6%苯酚摇匀后再加入5mL浓硫酸，振荡显色，静置30min后，于490nm处检测其吸光隊加入硫酸吋系统显色温度相差较大，而造成相应的偶然偏差。而改进后的方法，由丁•先把水和硫酸混合，对■浓硫酸起到了稀释作用，用冰水冷却最后加入苯酚品体，配成显色液。通过沸水浴加热来使其显色，保证了反应系统温

4、度一致，很好地解决了检测重现性与准确度的问题。1・3・3去除杂质方法的比较在多糊提取的过程屮，蛋白与淀粉的去除会影响到多糖的纯度与得率。因此本实验采用50%微波火力浸提30min,重复两次提取。考察了Sevage法与三氯乙酸法去蛋口法；同时也考察了淀粉一步消化法与两步消化法。正交实验见表1。实验结果见图loSevage法二氯乙酸法一步消化法两步消化法30%醇沉I7VVIIVVVIIIVVIVVVV图1正交实验结果由此町以看出：淀粉一步消化所得多糖略高于两步消化所得，可能是由于在较短的时间内淀粉未去尽，而淀粉本身就是-•种多糖物质，为了得到较纯的米糠多糖，实验优先考虑采

5、用两步消化法；在去蛋白的方法屮，比较II、IV得知，采用Sevage法与三氯乙酸法所得米糠多糖含量差别不大，考虑到Sevage法毒性较大，耗时较长，实验优先考虑三氯乙酸法。1.3.4米糠多糖提取方法选择1.3.4.1微波浸提法脱脂米糠与pH=5的盐酸水溶液以料液比为1：10混合置于50%微波火力下浸提30min,冷却，离心得上层液，重复提取两次，合并上层液。在上层液屮加入0.5%的耐高温—淀粉酶于70°C的水浴锅中保温消化2小时后，再加入().25%的().5%的耐高温a■淀粉他，在相同的条件下保温消化15小时，离心得上清液。用30%的三氯乙酸调节上述得到的上清液的p

6、H值=4.5(即米糠蛋白等电点，pl),置于4七冰箱中静置过夜，使得米糠蛋白得以充分沉淀。离心得上清液。在上述得到的上清液中，加入无水乙醇，使其含量为30%(V/V),置于4°C冰箱中静置过夜，离心，得到米糠粗多糖RBPa溶液。用722型分光光度计测其吸光值，计算米糠多糖含量。1.3.4.2热水蒸煮浸提法脱脂米糠与pH=5的盐酸水溶液以料液比为1：10混合置于110°C水浴锅屮，使其保持沸腾状态2小时，期间不断搅拌，定时补入损失的水分，冷却，离心得上层液，重复提取两次，合并上层液。下续步骤同1.322。1.3.4.3超声波浸提法脱脂米糠与pH=5的盐酸水溶液以料液比为

7、1：10混合，在80°C条件下超声提取30min,冷却，离心得上层液，重复提取两次，合并上层液。下续步骤同1.322。1.3.5比较结果上述方法均是参考了有关文献报道，采用的捉取率相对较高的实验条件。通过722型分光光计对两种糖含量的测定，见图2OnJ见，微波法不仅在提取时间阳口在糖的浸出率方面更具冇优势。因此实验采用微波浸提法，并对提取时间，提取火力进行了研究。图23种提取方法所得米糠多糖含量1.3.5微波浸提工艺1.3.5.1微波提取脱脂米糠与pH=5的盐酸水溶液以料液比为1：8混合，分别在50%微波火力条件下浸提30min(I),50min(I