泛耐药铜绿假单胞菌耐药机制研究进展

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万方数据医堂簦述!Q盟生!旦筮!』鲞筮2麴丛鲤i型鲢墼!Pi虫丛!：!垫!Q塑：!型：!!，丛!：圣泛耐药铜绿假单胞茵耐药机制研究进展·261·蝠露萄学魏树全△(综述)，赵子文+(审校)(广州医学院附属广州市第一人民医院呼吸内科，广州510180)中图分类号：R378．991文献标识码：A文章编号：1006-2084(2009)02-0261-05摘要：铜绿假单胞菌是医院感染最常见的病原菌之一，对多种抗生素有天生的耐药性。近年来随着广谱抗菌药物的大量应用其耐药情况日趋严重，甚至出现了多药酎药及泛耐药株。泛耐药铜绿假单胞菌的耐药机制极为复杂，主要包括耐药基因突变、产生灭活酶、改变药物的作用靶点、药物渗透障碍与主动外排机制高表达、形成生物被膜等。本文就近年来有关的研究进展进行综述。关键词：泛耐药；铜绿假单胞菌；耐药机制MeehanismsofAntimicrobialResistanceinPandrug．resistantPseudomonasAeruginosaWE!Shu—quan，ZHAOZi·welt．(DepartmentofRespiration，lkFirstMunicipalPeople’5HospitalofGuangzhou锄融缸-tedtoGuangzhouMedicalCollege．Guangzhou510180，C^ina)Abstract：Pseudomonasaeru面n08ahasbecomeoneofthemostimportantgram-negativepathogenasso-ciatedwithnosoeomialinfectionsandhasanintemalabilitytoacquireresistancetopolyantibiotie．Forthepastfewyears．overu∞ofbroadspectrumantibioticshasresultedinemergenceofresistantP．aeroginosa．Worryingly，multi—drugresistant(MDR)andpan·drugresistant(PDR)P．aeruginosawereincreasingglob·ally．MechanismsofAntimicrobialResistanceinPandmg．resistantPseudomonasaeroginosaiscomplex．inclu·dinggeneticmutation，inactivator，changeofantibiotictarget，low-permeabilityoutermembraneandexpres-sionofanumberofbroadly．specificmuhidrugefthx(Mex)systemsandbiofilm．Thepresentarticlereviewstherelativeprogressinthisfields．Keywords：Pandrug-resistance：Pseudomonasaeruginoga；Mechanism铜绿假单胞菌(pseudomonasaeruginosa，PA)是一种临床上重要的条件致病菌，致病力强，病死率高，耐药性强，且可造成院内感染流行，是院内感染常见的致病菌。由于广谱抗生素的广泛应用，PA对几乎所有抗PA抗生素的敏感性都在下降。2002年全国细菌耐药性监测网的数据显示：PA的分离率为10．3％，仅次于大肠埃希菌而居第2位⋯。近年来，随着广谱抗菌药物的大量应用，PA耐药的状况日趋严重，甚至出现多药耐药和泛耐药株口J。泛耐药PA的耐药机制十分复杂，本文将对近年来国内外针对泛耐药PA的耐药机制予以综述，以期对临床治疗有一定的帮助。1基因改变与耐药PA基因组上结构基因的突变、插入或缺失是导致多药耐药的分子生物学基础。由细菌自身基因突变而引起的耐药不能传播，但大多细菌的耐药可以在菌间进行转移，因此认为大多数细菌耐药是由获得外源耐药基因引起的。结构基因的改变可以导致以下的几种情况[2-4]：①使细菌表达水解酶或钝化酶水解或修饰抗菌药物而使抗菌药物失活。②药物作用靶位发生改变，不能与药物结合或亲和力降低。③细菌外膜蛋白发生改变，如基金项目：广东省自然科学基金(A5000423)数量减少，或孔道变小，导致细胞膜通透性降低，药物不能进入细菌体内。④主动外排机制增强，使药物在细菌体内不能形成有效的杀浓度。⑤形成生物膜。整合子机制是细菌获得外源性耐药基因从而得以造成菌间传播的重要机制。20世纪80年代Strokes等口1在对细菌耐药质粒和转座子进行系统研究时提出了整合子(integron)的概念。近年来的研究表明，整合子可捕获和整合细菌耐药基因，在细菌多重耐药机制中起重要作用怕J。整合子由整合酶基因、启动子区、整合酶特异性重组位点和数目不等的基因盒组成071。整合子根据整合酶基因不同分为6种类型。I类整合子的基本结构由3部分组成，两端是一段高度保守的序列，57CS和37CS，中间的区域称为可变区，可变区由一个或多个外来插入的基因盒组成哺J。Ⅱ类整合子常与Tn7转座子家族有关，其整合酶基因2是缺陷的整合酶基因，Ⅱ类整合子与其他用整合子的区别在于编码整合酶基因中含有一个终止密码子【9J。Ⅲ类整合子携带编码13内酰胺酶的基因盒，目前发现耐碳青霉烯类抗生素基因位于该整合子上¨0I。Ⅳ类整合子称为超级整合子，主要存在于霍乱菌株中。临床分离的多重耐药铜绿假单胞菌主要含有I类整合子和Ⅲ类整合子‘6】2产生灭活酶2．1产生13内酰胺酶PA对13内酰胺类抗菌药物产生获得性耐药的主要机制是产生13内酰胺酶。它能够破坏渗透入菌体内的B内酰胺类抗生素的活性。B内酰胺酶的产生可以是染色体依赖的，也可以是质粒介导的，即获得性耐药。由于获得性耐药是引起耐药菌流行的主要方式，尤其引起人们的高度 万方数据·262·医堂绽述呈Q鲤生!旦筮!!鲞筮!翅丛型i!!!曼丝!唑!堕!：』垫!Q塑，!!!：!!：塑!：兰重视oB内酰胺酶的种类繁多，功能也不尽相同。按分子生物学分类可分为A、B、C、D四类，其中A、C、D类以丝氨酸为基础的机制发挥作用，而B类作用时需要锌的参与，又称为金属酶(metallo—B—lactamase，MBL)oit]。Bush等¨引在1995年提出了13内酰胺酶的最新分类法，即功能分类，将13内酰胺酶分为4群：第1群为头孢菌素酶，不能被克拉维酸抑制，属于分子生物学分类中的c类。第2群为B内酰胺酶，可被克拉维酸抑制，相对应于分子生物学分类中的A类和D类。第3群是以锌为基础的酶或称金属B内酰胺酶，对应于分子生物学分类中的B类。第4群是不被克拉维酸抑制的青霉素酶，尚无相对应的分子生物学分类。近年来，随着新的广谱抗生素的广泛应用，PA可产生多种针对抗生素的13内酰胺酶，主要有超广谱p内酰胺酶、AmpCl3内酰胺酶、金属p内酰胺酶等。超广谱B内酰胺酶属于Bush分类的第2群，分子生物学分类的A类酶。编码超广谱B内酰胺酶的基因常由含多种耐药基因的可接合性质粒携带，能够在不同的菌种、株间呈水平传递，引起医院内感染的爆发流行。超广谱B内酰胺酶大多源于TEM一1、TEM-2和SHV一1型基因的突变。近年来，在PA中人们陆续发现了SHV．2ct、PER、VEB等突变的超广谱p一内酰胺酶。超广谱B内酰胺酶的特征是能够水解广谱青霉素、第3代头孢类及单环类抗生素的13一内酰胺酶，但对头霉素、碳青霉烯类抗生素及酶抑制剂敏感‘13’141。AmpCi3内酰胺酶(简称AmpC酶)，代表了由革兰阴性杆菌产生的不被克拉维酸抑制的丝氨酸头孢菌素组成的一个酶家族，又称为头孢菌素酶。属Bush分类的第1群，分子生物学分类中的c类酶。通常认为AmpC酶由染色体编码，具有很强的可诱导性，在野生型PA株中只产生少量的AmpC酶，但在B内酰胺类抗生素诱导剂存在时，AmpC酶的产量明显增加，诱导后增加的范围在100～1000倍¨引。而自1988年美国学者发现第一个质粒介导的AmpC酶ll刨(MIR一1)后，质粒介导的AmpC酶引起越来越多的关注。与染色体介导的AmpC酶不同，质粒介导的AmpC酶持续高水平表达，且可通过转化、接合等方式转移给其他菌种，造成耐药性的广泛传播。目前发现的质粒介导的AmpC酶主要存在于肺炎克雷伯杆菌、沙门菌、弗劳地枸橼酸杆菌、产气肠杆菌、奇异变形杆菌、大肠埃希菌。而在PA中主要为染色体介导的AmpC酶。但国内有报道从PA中检出质粒型AmpC酶DHA基因¨7J。AmpC酶对第3代头孢菌素和头孢霉素耐药，B内酰胺酶抑制剂对其不能起作用，但对碳青酶烯和第4代头孢较为敏感¨引。MBL是近年来发现的一类重要的B内酰胺酶，其活性部位为金属离子(主要为zn2+等)，且必须依赖它们的存在才发挥催化活性。属Ambler分类的B。类，Bush功能分类中的第3群。MBL可分为天然来源的MBL和获得性MBL。20世纪90年代以前报道的金属酶均为染色体基因编码的，广泛存在于临床的罕见菌中，如蜡样芽孢杆菌、嗜麦窄食单胞菌、黄杆菌属等。1991年13本首次报道在铜绿假单胞菌中发现质粒介导的金属酶IMP一1型酶¨引。由于其编码基因位于可移动的质粒或I类整合子上，其耐药性可以在不同细菌间水平传播，因而将其命名为获得性金属酶。已经被发现的该类金属B内酰胺酶基因型包括：IMP、VIM、SPM、GIM、CfiA(CerA)和SIM等，其中尤以IMP和VIM型为主，并且根据基因和翻译的氨基酸序列不同分为多种亚型。迄今为止，PA中已发现了4种金属酶：IMP、VIM、SPM以及GIM，各种金属酶中又分为若干亚型。其活性不被克拉维酸等B内酰胺酶抑制剂所抑制，但可被乙二胺四乙酸所抑制。MBL对包括大部分B内酰胺类、碳青霉烯类抗生素及克拉维酸、他唑巴坦和舒巴坦等B内酰胺酶抑制剂均可产生耐药，使队表现为泛药耐药特性ⅢJ。2．2产生氨基糖苷类钝化酶PA产生氨基糖苷类钝化酶是多重耐药的机制之一。氨基糖苷类抗生素通过阻止RNA与核糖体结合，阻断敏感蛋白的合成，破坏细胞膜的完整性，对繁殖期和静止期细菌均有作用。氨摹糖苷类钝化酶通过对药物的基团进行修饰，使药物失活。根据氨基糖苷类钝化酶类型不同可分为：①氨基糖苷乙酰转移酶(amino．glycosideacet，rhransferases，AAC)，使游离氨基乙酰化，由aac基因编码；②氨基糖苷核苷转移酶(aminoglycosidenueleOtidyltransferases，ANT)，使游离羟基核苷化，由ant基因编码；③氨基糖苷磷酸转移酶(aminoglyeo—sidephos．photransferases，APH)，使游离羟基磷酸化，由aph基因编码。经修饰酶修饰后的氨基糖苷抗生素可通过以下机制失活：①与未经修饰的氨基糖苷类竞争细菌体内的转运系统，减少药物摄入；②使氨基糖苷类不能与核糖体结合；③失去了干扰核糖体功能的作用。目前已发现超过50种氨基糖苷类修饰酶，其编码基因序列多已被测定。其中已报道的在PA中存在的类型有：AAC(3)一I、AAC(3)1I、AAC(3)一11I、AAC(6’)一I、AAC(6’)一lI、ANT(2”)．I、ANT(3”)一I、ANT(47)．II、ANT(4’)-IIa、ANT(4’)一Ⅱ 万方数据医堂绫渣!Q塑生!旦笙!§鲞簋!翅丛塑i型旦!!业堕!型!，』鲤!Q塑：!生：!!：盟!：兰b、APH(3’)一I、APH(3”)一II、APH(37)．Ⅵ及APH(2”)，其中AAC(6’)一Ⅱ和ANT(2”)一I是PA中最常见的氨基糖苷类修饰酶L21|。3改变药物的作用靶点抗生素作用靶点在微生物生长与存活中起重要作用。很多抗生素就是通过作用于这些作用靶点干扰细菌的生长来发挥抗菌活性。青霉素结合蛋白(Penicillin-Binding—proteins，PB—Ps)是位于细菌细胞内膜上的一些膜蛋白，是p内酰胺类抗生素的专一性作用靶点，最初因为能与青霉素共价结合而得名。PBPs是参与细菌细胞壁肽聚糖生物合成的酶，包括转肽酶、羧肽酶和内肽酶。它的正常存在是细菌保持正常形态及功能的必需条件。B内酰胺类抗生素正是通过与PBPs结合抑制细菌细胞壁的生物合成引起细菌细胞死亡从而发挥杀菌作用B引。当细胞膜上的PBPs数量减少，或者PBPs的结构改变或产生一种新的PBPs，使其与13内酰胺类抗生素的亲和力明显降低，就会产生耐药。这种机制与13内酰胺酶能发生协同效应，引起细菌对B内酰胺类抗生素的耐药。国外有报道认为，PBPs除了作为13内酰胺类抗生素的作用靶点外，同时参与AmpC酶的诱导产生过程Ⅲo。目前对PBPs的研究以大肠埃希菌最为清楚，但迄今为止没有发现由PBPs介导的大肠埃希菌的耐药性。典型的大肠埃希菌具有7种PBPs：PBPla／PBPlb，PBP2、PBP3，PBP4，PBP5、PBP60PA的PBPs类型与大肠埃希菌高度相似，但大肠埃希菌中的PBP6在PA中缺失或微表达[243。目前认为是基因突变使细菌上PBPs出现数最减少，或者PBPs的结构改变或产生一种新的PBPs，从而导致细菌对抗生素的耐药。Leqaree等旧副发现在PA上诱导编码PBP2的基因PBPA突变可以使PA对B内酰胺类抗生素产生耐药。Bellido等悼6J和Lepper等拉71均发现PBP4的改变可能参与PA对亚胺培南的耐药，并与膜通透性改变和外膜蛋白表达减少协同作用。拓扑异构酶Ⅱ、Ⅳ是氟喹诺酮类抗生素的主要作用靶点。氟喹诺酮类药物通过形成DNA一拓扑异构酶一氟喹诺酮类药物三元复合物，阻止DNA拓扑异构变化，妨碍细菌DNA复制、转录，以达到杀菌的目的。拓扑异构酶Ⅱ是由两种亚基即A和B两种亚基组成的四聚体，分别由gyrA和gryB基因编码；而拓扑异构酶Ⅳ为C和E两种亚基组成的四聚体，分别由parC和parE基因编码。gyrA基因和gryB基因分别与parCt基因和parE基因同源，5’末端均有一段核苷酸序列与氟喹诺酮耐药性密切相关，被定义为氟·263·喹诺酮耐药决定域mJ。氟喹诺酮耐药决定域突变导致拓扑异构酶Ⅱ和Ⅳ结构改变，DNA一拓扑异构酶一氟喹诺酮类药物三元复合物，从而抑制了氟喹诺酮的活性‘圳。16s核糖体RNA(16srRNA)是氨基糖苷类抗生素的作用靶点。有研究发现，16srRNA的特定突变是链霉素耐药的一个原因啪J。这种突变在部分革兰阴性杆菌如大肠埃希菌中发现，多药耐药的PA中可能也存在这种突变。此外PA可改变体内的二氢叶酸合成酶使该酶与磺胺类药物的亲和力大为降低而引起对磺胺类药物的耐药。4药物渗透障碍与主动外排机制细菌的耐药与外膜通透性有关。抗生素的作用靶点位于细胞内膜或细胞内，药物要接触作用靶点必先通过细胞外膜。PA的外膜由微孔蛋白孔道组成，仅允许相对分子质量<(350～400)x103的糖类通过口1|，因其外膜通透性极低，仅为大肠埃希菌的1％～8％左右，这可以解释PA对大多数抗菌药物存在天生耐药性。PA细胞的细胞壁两侧具有内外内外两层膜，抗菌药物必须首先通过外膜才能到达其作用靶位。PA外膜过滤成分主要为脂多糖，脂多糖对抗菌药物进入细菌具有很强的阻碍作用∞引。PA外膜上有多种外膜蛋白OprC、OprD2和OprEl等，可形成小孔通道，抗菌药物经这些外膜通道进入细菌，如果这些通道改变或缺失，抗菌药物将不能进入细菌到达作用靶位。Quinn等∞列在1986年首次对PA的外膜蛋白在耐碳青霉烯类抗生素机制中的作用进行报道。目前已经清楚，OprD2是亚胺培南为代表的碳青霉烯类抗生素(美罗培南除外)进入PA体内的特异性通道∞4|。而其他13内酰胺类抗生素不能通过该通道，因此从理论上碳青霉烯类抗生素与B内酰胺类抗生素之间无交叉耐药性。但实际上交叉耐药是存在的，Pour-nara8等¨纠实验发现大部分耐药PA株存在交叉耐药，因此认为可能多种耐药机制同时存在。在亚胺培南耐药株上可发现OprD2缺失，而在体外通过质粒将OprD2转导入OprD2缺失的亚胺培南耐药株，发现该耐药株恢复了对亚胺培南的敏感性，并在外膜上有OprD2的表达mJ，因此认为OprD2的缺失是造成是造成亚胺培南耐药的重要机制。而如果OprD2减少同时合并MexAB—OprM上调则对美罗培南也耐受。而且还能对喹诺酮类及其他p内酰胺类耐药。Ochs等∞¨发现，nfxC(mexT)突变可以导致OprD2减少和MexEF—OprN上调，而且少量表达MexAB—OprM，结果使PA同时对亚胺培南和喹诺酮 万方数据·264·医堂绫述!Q塑生!旦筮!!鲞筮!翅丛!!i型旦!!!吐!!坐，』塑呈Q塑：!!!：!i，塑!：2类耐药，并且对美罗培南的敏感性降低。因此认为多药耐药的PA还存在着另外一种与外膜通透性相关的机制，即主动外排机制。PA的细胞外膜上还存在着一组功能特异的外膜蛋白，它们与细菌的耐药关系密切，即主动外排系统。PA的主动外排系统主要由3部分组成：①外膜通道蛋白，如OprM、OprJ和OprN等，形成门通道，使药物排出到菌体外；②内膜蛋白，如MexB、MexD和MexF等，为主要的主动外排蛋白，具有识别药物的作用，但不具有特异性；③连结蛋白或辅助蛋白，如MexA、MexC和MexE等，能连接细胞内、外膜蛋白，与它们一起形成了主动外排系统并开口于外膜的复合体，使药物直接泵出到菌体外口2l。PA中主要存在4类主动外排系统，即MexAB—OprM、MexCD-Opd、MexEF—OprN和MexXY—OprM。近年来又发现了MexJK．OprM、MexGHI．OpmD和MexVW．OprM‘38圳。其中MexAB—OprM发现最早，研究也较多，在PA的多重耐药中起着最为重要的作用。目前研究表明，MexAB—OprM是惟一的确定存在于野生型PA中的外排蛋白，对其天生的耐药性起重要作用MI'4引。MexAB．OprM外排系统的作用底物为13内酰胺类、氯霉素、四环素、氟喹诺酮类、新生霉素、大环内酯类、甲氧苄啶和13内酰胺酶抑制剂等Hl’421。因此可以导致野生型PA对以上药物产生耐药。一般认为，在通常的实验室条件中，MexCD—OprJ、MexEF-OprN和MexXY—OprM并不表达或表达量很低，需要通过诱导才能表达。MexCD—OprJ型外排泵只在nfxB型突变株中表达，对氯霉素、大环内酯类抗生素、新生霉素、喹诺酮类抗生素、四环素和头孢烯类耐药，但对大量B内酰胺类抗生素高度敏感。MexEF—OprN型外排泵仅在nfxC型突变株中表达，对氯霉素、喹诺酮类、甲氧苄啶及头孢烯类产生耐药性。表达MexXY—OprM型外排泵的菌株对氨基糖苷类，红霉素和氟喹诺酮类耐受。虽然MexXY—OprM是近来研究最多的一类多重药物主动外排泵系统，可介导PA的固有耐药和获性耐药，但是大量的资料显示MexAB—OprM仍然是PA中最重要的外排系统‘圳。5生物被膜的形成随着生物医学材料的广泛应用，特别是重症监护病房气管插管和静脉置管增多，PA极易形成生物被膜以逃避机体的免疫系统和抗菌药物的杀灭作用。生物被膜是指细菌黏附于固体或机体腔道表面，形成微菌落，并分泌细胞外多糖蛋白复合物将自身克隆包裹其中而形成的膜状物，又称胞外多糖(或多糖蛋白)复合物⋯】。生物膜内细菌表现出高度耐药性的确切机制目前还不清楚，目前倾向于认为弥散屏障、微环境改变和抵抗表型是细菌生特耐药机的主要机制。藻酸盐多糖是PA生物膜基质的主要成分，可阻碍抗菌药物的渗入，带正电的氨基树脂基糖苷类抗生素可以与带负电的藻酸盐结合，从而限其弥散ⅢJ。氟喹诺酮类抗生素可迟缓地渗透入细菌生物膜胞外多糖基质，但却达不到有效的杀菌浓度，长期反复使用反而有利于启动B内酰胺酶的表达，诱发对B内酰胺类抗生素的耐药。藻酸盐多糖可以结合多种水解酶，使抗菌药物未进入细胞内即已灭活。在生物内部不同部位存在营养梯度、代谢产物浓度梯度、渗透压和氧浓度梯度等，因此，生物膜内部的细菌呈生长多态性。位于被膜深部的细菌很难获得充足的营养和氧气，代谢废物也不能及时清除，因此这些细菌代谢活动低，甚至处于休眠状态，对抗菌药物不敏感【拍J。由于基因的突变或者获得外来基因使PA从非黏液型转化为黏液型，过量表达藻酸盐，可能也是使PA对抗菌药物敏感性下降的一个因素。PA的耐药机制极为复杂，对抗菌药物的耐药不是由单一因素造成的，特别是近年来多药耐药PA株的出现，使其耐药机制更趋复杂，常是多种机制协同作用。PA有其天生的耐药性，但临床上不合理应用抗生素是导致其耐药的更重要因素。因此如何合理应用抗生素是更重要的课题。参考文献[1]马越，李景云，张新妹，等．2002年临床常见细菌耐药性监测[J]．中华检验医学杂志，2004。27(1)：38-45．[2][3]TenoverFC．Mechanismsofantimicrobialresistanceinbacteria[J]．AmJInfectControl，2006，34(5Suppil)：s3—10．Henrich_freiseB．WiegandI．PfisterW．eta／．Resistancemecha-nismsofmultiresistantPseudomonasacI'U面nosastrainsfromGex-manyandcorrelationwithhypermutation[J]．AntimicmbAgentsChemother。2007，5l(11)：4062-4070．RyderC．ByrdM。WozniakDJ．RoleofpolysaeeharidesinPseudo-monagBeruginosabiofilmdevelopment[J]．CurrOpinMicmbiol，20cr7。10(6)：644—648．StokesHW．HallRM．ANovelfamilyofpotentiallymobileDNAe1．ementsencodingsite—specificgeneintegrationfunctions：integrons[J]．MolMicmbiol，1989，3(i2)：1669·1683．BennettPM．PIasmidencodedantibioticresistance：acquisitionandtrarmferofantibioticresistancegeniesinbacteria[J]．BrJPharma-col，2008，153(Suppl1)：$347-3S7．FluitAC，SehmitzFJ．Resistancetntegronsandsuper-integrons[J]．ClinMicmbioiInfect，2004，10(4)：272-288．K0seo静uO．Integrons[J]．MikrobiyolBul，2004，38(3)：305-312．HanssonK，SundstromL，PelletierA，eta／．Intl2integronintegraseinTn7[J]．JBacteriol，2002，184(6)：1712-1721．CoilisCM，KimMJ，PartridgeSR，eta／．Characterizationoftheclass3integronandthesite．specificrecombinationsystemitdeter-mines[J]．JBacteriol，2002，184(11)：3017-3026．Samaha-KfouryJN，AraiGF．Recentdevelopmentsinbetalaetama-嘲andextendedspectrumbetalactamases[J]．BMJ，2003，327(7425)：1209．1213．1J1；1{H眵№p哺pm¨rL 万方数据匿堂堡渣!Q塑堡!旦筮!!鲞筮!魍丛!些坐堕翌堑!!坐：』磐呈Q塑：№!：!!，墼!：兰[12]【13][14][15]【16][17][18][19][20][21][22][23][24]【25][26]【27]C28][29][30]BushK．JacobyGA。Medeiros从．Afonotionalclassification∞hemeforbets—lactamasesanditscorrelationwithmolecularstructure[J]。AntimicmbAgentsChemother，1995，39(6)：12ll—1233．BradfordPA．Extended·spectrumbets-lactamasesinthe21stcen—mr,／：characterization，epidemiology，anddetectionofthisimpor-tsntresistancethreat[J]．ClinMicrobiolRev，2001，14(4)：933-951．赵廷坤，周歧新，凌保东．铜绿假单胞菌产B内酰胺酶研究进展[J]．国际流行病学传染病学杂志，2006，33(3)：2ll-214．HansonND．AmpCbeta—lactamases：whatdoweneedtoknowforthefuture?[J]．JAntimierobChemother，2003，52(1)：24．PapanicolaouGA．MedeirosAA，JacobyGA．Novelplasmid-media-tedbeta-lactamase(MIR-1)conferringresistancetooxyimino-andalpha·-methoxybeta—lactamsinclinicalisolatesofKlebsiellapneu··moniae[J]．AntimicrobAgentsChemother，1990，34(11)：2200_2209．李智山，邓三季．杨燕，等．铜绿假单胞菌质粒型AmpC酶DHA基凼的发现[J]．中华医院感染学杂志，2005，15(3)：253-255．ThenRL．Abilityofnewerbeta-lactamantibioticstoinducebeta·lactsmaseproductioninEnterobactercloacae[J]．EurjClinMi·crebiol。1987，6(4)：451-455．WataeabeM。lyobeS，InaneM，eta／．Transferableimipenemresist-anteinPseudomonasaerugin06a[J]．AntimicrobAgentsChemoth·er，199I，35(1)：147-151．RasmussenBA，BushK．Carbapenem—hydrolyzingbeta—lactamases[J]．AntimicrobAgentsChemother，1997，41(2)：223-232．PoohK．AminoglycosideresistanceinPseudomonasaoi'uginota[J]．AnAgentsChem，2005，49(2)：479-487．熊哑莉．青缫素结合蛋白研究进展【J]．国外医药抗生素分册，2004，25(5)：193-197．SandersCC。BradfordPA，EhrhardtAF，et口z．Penicillin．bindingproteinsandinductionofAmpCbeta—lactamase[J]．AntimicrobA·gentsChemother．1997，41(9)：2013-2015．张凤凯，金少鸿．8内酰胺类抗菌素的作用靶位一青霉素结合蛋白[J]．国外医药抗牛索分册，2005，21(3)：107-110．LegareeBA，DanielsK，WeadgeJT，eta1．Functionofpenieil·lin·bindingprotein2in"dabilityandmorphologyofPseudo-monasaeruginosa[J]．JAntimicrobChemother，2007，59(3)：411424．BellidoF．VeutheyC，BluserJ，eta1．NovelresistancetoimipenemassociatedwithanalteredPBP-4inaPseudomonasaellll画11088．clinicalisolate[J]．JAntimicrobChemother，1990，25(1)：57_68．LepperPM，GrusaE，ReiehiH，eta1．Consumptionofimipenemcorrelateswithbeta·lactamresistanceinPseudomonasaerngino-su[J]．AntimierobAgentsChemother，2002。46(9)：2920-2925．HorowitzDS，WangJC．MappingtheactivesitetyrosineofEsche-fiehiacoilDNAgyraae【J]．JBiolChem，1987，262(11)：5339-5344．AkasakaT，TanakaM，YamaguchiA，eta／．TypeIItopoisomerasemutationsinfluorequinolone．resistantclinicalre'sinsofPseudo-molla8flerugJnosaisolatedin1998and1999：roleoftsrgetenzymeinmechanismoffluoroquinoloneresistance[J]．AntimicrebAgentsChemother，2001．45(8)：22632268．HonoreN。MarchalG．ColeST．Novelmutationin165rRNAalmo-·265·elatedwithstreptomycindependenceinMycobacteriumtubereub8is[J]．AntimicrohAgentsChemother。1995，39(3)：769-770．[31】YoneyamsH，NakaeT．Mechanismofefficienteliminationofpro-tein1)2inoutermembraneofimipenem—resistantPseudomonasaerngiu08a【j]．AntimiembAgentsChemother，1993，37(11)：2385-2390．[32]NikaidoH．PreventionofdrugaceesBtobacterialtargets：permea-bilitybarriersandactiveefflux[J]．Science，1994，264(5157)：382-388．[33]QuinnJP，DudekK1，DiVincenzoCA，eta／．Emergenceofresist-antetoimipenemduringtherapyforPseudomonasaerugJnotain-fectious[J]．JInfectDis，1986，154(2)：289-294．f341SuzukiY。MatsumotoY，NishinariC。eta1．Antimicrobialaetivitiesofmeropenemagainstclinicallyisolatedstrainsin1997[J]．JpnJAntibiot。1999，52(12)：695-720．[35]PonrnarasS，ManiatiM，PetinakiE，eta／．Hospitaloutbreakofmul-tipleclonesofPseudomonasacrugino∞carryingtheunrelatedmet-allo-beta—lactamasegenevariantsblaVlM-2andblaVlM-4[J]．JAntimierobChemother，2003，5l(6)：1409—1414．[36]LiXZ，ZhangL，PooleK．InterplaybetweentheMexA-MexB·OprMmultidrugeffluxsystemandtheoutermeInhranebarrierinthemul．tipleantibioticresistanceofPseudomonasaerngino∞[1]．JAntimi—crobChemother，2000，45(4)：433-436．[37]OchsMM，McCuskerMP，BainsM。eta1．NegativeregulationofthePseudomonasaeruginosaoutermembraneporinOprDselectiveforimipenemandbasicaminoacids[J]．AntimicrobAgentsChemoth—er，19919。43(5)：1085一1090．[38】ChuanchuenR，NarasakiCT，schweizerHP．TheMexJKeflluxpumpofPseudomonasaeruglllosarequiresOprMforantibioticef-fluxbutnotforemuxoftrielesan[J]．JBacteriol，2002，184(18)：5036．5044．f39]AendekerkS，GhyselsB，CornelisP，eta／．Characterizationofaneweftuxpump，M既GHI—OpmD。fromPseudomonosaeroginogathateonfecsresistancetovanadium【J]．Microbiology，2002，148(Pt8)：2371-2381．[柏]bY，MimaT，KomofiY，eta／．Anewmemberofthetripartitemul·tidrugeflhxpumps．MexVW·OprM．inPseudomonasaerugin06a[J]．JAntimicmbChemother，2003，52(4)：572475．[41]LiXZ，NikaidoH，PooleK．RokofmexA-mexB-oprMinantibioticeffiuxinPseudomonasaeruginosa[J]．AntimicrobAgentsChe-mother。1995。39(9)：1948·1953．[42]JoJT，BrinkmanFS，HancockRE．AminoglycesideeffluxinPseud·omona8aernginosa：involvementofnoveloutermembraneproteins[J]．AntimicrobAgentsChemother，2003，47(3)：1101一llll．[43]OkamotoK，GotohN，NishinoT．ExtrusionofpenemantibioticsbymultieomponenteffluxsystemsMexAB—OprM，MexCD-Opd，andMexxY·OprMofPseudomonasaemginosa[J]．AntimicrnbAgentsChemother。2002，46(8)：2696-2699．[“]PeytonBM。CharacklisWG．Mierobialbiofilmsandbiotilmreactors[J]．BioproeessTeehnol，1995，20：187-231．[45]DaveyME，CaiazzaNC，O’TooleGA．Rhamnolipidsttrfaetantpro-ductionaffectsbiofilmarchitectureinPseudomonasflertl【西noaflPA01[J]．JBactcrioi，2003。185(3)：1027-1036．[46]WaitersMC3rd，RoeF，BugnicourtA，以以．Contributionsofanti-bioticpenetration，oxygenlimitation，andlowmetabolicactivitytotoleranceofPseudomonasaelrUglnosabiofilmstoeiprofloxacinandtobramyein[J]．AntimierobAgentsChemother，2003，47(1)：317．323．收稿日期：2008．．094)4修回日期：2009-01-02·+-+·+·—卜+-+-+-+--●--．-4---4----+---4---+---4--+-卅●-．．--6--4'--+-。+。-_——+-+·+一+-+-+—+—+·+-+-+-—●——●。—+。+-+-+。’卜——。卜。。卜。—’卜。。+一漱迎阋读淤迎赐漓