致畸胎敏感实验1

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1、传统致畸胎敏感试验12一：实验目的1.掌握致畸胎敏感实验的实验方法。2.熟悉致畸胎实验方法的应用。3二：试剂和实验动物1.试剂：①1％KOH；2%KOH溶液；②80％乙醇溶液；③茜素红原液；④透明液Ⅰ；⑤Bouin液；⑥阿利新蓝染液。2.试验动物：通常两种，一种啮齿类，首选大鼠，另一种非啮齿类，一般选家兔，具体依情况而论。每个剂量组16-20窝。4三：剂量设计一般设3个试验组，最高剂量组应是有轻微母体毒性的剂量，最低剂量组不应引起明显的毒性效应，中间剂量要有助于观察评价剂量反应关系。可依据：①亚急性毒性试验的最大耐受量作为致畸试验的最高剂量，以其1/30为最低剂量。②以L

2、D50为参考，以LD50的1/2~1/3为最高剂量，LD50的1/30~1/50为最低剂量。③人体实际接触量。另设2个对照组，一个为空白对照或溶剂对照，另一个为阳性对照。常选用的阳性药物有敌枯双、阿斯匹林、维生素A、五氯酚钠等。5四：动物分组和给药1.交配：通常大鼠按雌:雄1:1、小鼠按雌:雄2:1的比例以4～5天为1个周期进行交配（大鼠性周期4~5天，小鼠性周期为4天）。次日晨阴道涂片镜检,查到精子或发现阴栓为妊娠0d。2.动物分组：将受精鼠按完全随机化分组分为5组,即一个阴性对照组、三个实验组和一个阳性对照组,每组16窝。3.给药:给药途径原则上是依据人类可能接触的方

3、式等情况，及受检物的性质而定，经呼吸道、经口、经皮、腹腔注射或尾静脉注射等。给药时间：应在器官形成期给药，大鼠孕后7～16天，小鼠为6～15天，兔为6-18天。6五：终末处死和标本制备在自然分娩前一天称重并处死孕鼠，大鼠为d20，小鼠d19，以防止自然分娩后，母鼠吞噬畸形仔。将剖检活胎的1/2置80%乙醇中固定,余下1/2活胎置Bouin氏液中固定。将乙醇固定2d的胎鼠,取出内脏,经KOH透明2-7天,茜素红染色2-3天制备骨骼标本,在解剖镜下进行骨骼系统检查。经Bouin氏液固定2周的胎鼠,行大体徒手切片进行内脏检查。。7六：观察指标1.孕鼠：每日观察记录孕鼠一般症状,

4、并称取妊娠0、7、10、13、16d和20d孕鼠体重，一般3天称重一次。妊娠20d将孕鼠颈椎脱位处死,记录黄体数、着床数、活胎数、死胎数和吸收胎数,称取子宫重和活胎重。计算体重净增值(净增值=妊娠20d孕鼠体重-妊娠0d体重-怀孕子宫重)。2.胎鼠外观：测量活胎身长和尾长,检查活胎有无外观异常,外观异常主要包括：①头部畸形：观察有无脑积水、露脑、无脑畸形、脑膜膨出、无眼、小眼、无耳、小耳、腭裂等；②四肢畸形：观察有无多趾、并趾、少趾、无趾、足内翻、短肢等；③躯干畸形：如脐疝、腹裂、脊髓膨出、脊柱裂、脊柱侧突等；④尾畸形：观察有无短尾、卷尾、无尾、尾分叉等；⑤有无肛门闭锁等

5、。鉴定活胎性别。8六：观察指标3.骨骼检查：①头部骨骼：颅顶骨缺损、骨化迟缓，枕骨缺损、缺失②椎骨：颈椎骨缺损、椎弓不连续、骨化迟缓，腰椎缺失、分裂变形，盘骨缺失，尾椎骨缺失、椎弓不连续、融合；③胸骨：正常情况下胸骨是6个，骨化迟缓或骨骼畸形时可发生胸骨节缺损或消失，单、双骨化点或不到正常的1／2，胸骨节错位等；④肋骨：正常大小鼠肋骨为13对，可出现多肋、少肋、肋骨分叉、肋融合、波状肋等；⑤四肢骨：观察骨化程度、粗短、畸形、多趾（指）、少趾（指）等。9六：观察指标切片顺序下刀部位和方向横断面所见1从鼻孔下通过眼球中部向上部切大脑、侧脑室、眼球、鼻中隔、鼻腔2把嘴打开，从舌

6、向口角下切，向枕部切大脑、间脑、延脑，下横断面看腭裂3齐下颌向颈后切舌、鼻咽腔、延髓4从双肩上沿向颈后切气管、食道、胸腺5从前肢剪断面中央向后切肺、纵隔、心房、脊髓6从剑突下向后切肺、心室、心室中隔7脐至剑突间1/2处向后切肺、横膈8从脐向后切肝、胃（小部分）9腹股沟至脐间1/2处向后切胃（大部分）、肝、十二指肠、肾上腺10相当于髂骨前棘处向后切10相当于髂骨前棘处向后切胃（小部分）、肝、肾、脾、胰、肠11（不必切，用眼科镊解剖）生殖器、膀胱、肾4.内脏检查：表1：胎鼠徒手切片检查内脏畸形10七：结果分析和评价一：结果分析1.对母体一般情况及体重的影响；2.对母鼠生殖能力

7、的影响：孕体着床数、活胎数、吸收胎数和死胎数；3.对胎鼠外观发育的影响：体重、身长、尾长及外观异常；4.对胎鼠骨骼发育的影响（骨骼畸形发生率）；5.对胎鼠内脏发育的影响（内脏畸形发生率）。注：常用统计学方法：各种“率”用卡方检验，体重等计量资料用方差分析。11七：结果分析和评价二.结果评定根据观察到的效应和产生效应的剂量水平进行评价，主要有以下两种方法。1.致畸指数=雌性动物LD50/最小致畸剂量评判参考以下标准：致畸指数小于10为基本无致畸危害；致畸指数da于10为有致畸危害；致畸指数大于100为强致畸危害；2.相对致畸指数