遗传学实验指导

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1、实验一染色体组型分析一、实验目的1.熟悉染色体的结构特征。2.初步掌握染色体核型分析的方法。实验原理染色体核型分析是阐明牛物染色体组的构成，从而为物种的起源和进化的研究提供客观根据，为调查异源染色体的附加、代换乃至易位提供细胞学证明。植物染色体的核型分析，往往从细胞的形态学特点来分析。它所依靠的形态学指标是:1.染色体长度；2.着丝粒位置；3.副缢痕的有无和位置；4.随体的有无、形状和犬小。三.实验用品：细胞染色体照片，眼科剪刀，测量工具，胶水等。四.实验方法：1.剪贴：用眼科剪刀，沿染色体边缘将每-•条染色体剪下來

2、，存放备用。2.配对：首先忖测配对，根据染色体反短和形态特征，进行同源染色体配对。3.排列：按一定顺序将一个细胞内的染色体进行排队、编号。排列方式有多种，一般从大到小排列，短臂朝上，如玉米、草棉核型；相同长度的染色体，按短臂长度排列，短臂长的在前;有特殊标记的染色体（如随体）口J特殊排列，如栽培大麦核型；性染色体单独另排或放在最后。也可将形态相同的染色体归为一组，分成若干组，按组排列，如山羊草属植物染色体核型；异源多倍体要根据不同染色体组排列，如普通小麦核型要按A、B、D三个染色体组排列。4.测量：利用测量工具，测量

3、染色体的如下数据：绝对长度=照）丫长度/放大倍数染色体相对氣度=每对同源染色体绝对长度/染色体总长度臂比=染色体长臂/染色体短臂将上列数字填入表1:表1染色体测量数据序号相对长度（％）臂比类型5.校止：根据测量数据校正目测同源染色体配对和染色体排列顺序是否正确，再进行重新排列,并黏贴在实验报告上。6.分类：依据臂比，将染色体分类。表2染色体分类标准染色体类型臂比（长臂/短臂）正屮部着丝点类型（M）1.0中部着丝点类型（m）1.01-1.7近中部着丝点类型（sm）1.71-3.0近端着丝点类型（st）3.01-7.0端

4、着丝点类型（t）7.02顶端着丝点类型（T）OC5.核型公式：根据染色体类型，可以将一种生物的染色体核型书写成一定公式。例如芍药核型为：K(2n)=2X=10=6m+2sm+2st(SAT)。K代表基木核型，SAT代表具随体染色体，写在括号内，符号前的数字代表该类染色体数口。实验二质粒DNA的制备—、实验目的掌握碱裂解法抽提质粒的原理、步骤及各试剂的作用。二、实验原理在pH12.0〜12.6碱性环境中，细菌的线性大分子量染色体DNA变性分开，而共价闭环的质粒DNA虽然变性但仍处于拓扑缠绕状态。将pH调至中性并有高盐存

5、在及低温的条件下，大部分染色体DNA、大分子量的RNA和蛋白质在去污剂SDS的作用下形成沉淀，而质粒DNA仍然为可溶状态。通过离心，可除去大部分细胞碎片、染色体DNA、RNA及蛋口质，质粒DNA尚在上清屮，然后川酚、氯仿抽提进一步纯化质粒DNAo三、实验材料、仪器设备及试剂1.仪器：低温离心机、冰箱、高压灭菌锅、漩涡振荡器、恒温摇床等2.材料：PCAMBIA2300质粒、人肠杆菌DH5a3.试剂：LB液体培养基、Amp、SolutionIaSolutionIIaSolutionITRTE>酚/氯仿/异戊醇（25：24

6、：I）等四、实验步骤：1.菌才签挑取单菌落，接种于含有Amp抗生素的LB培养基屮，37°C摇床,250r/inin过夜培养；2.吸取1.5ml菌液，5000rpm离心2分创h收集菌体，倒掉菌液；吸収1.5ml菌液，再次收集菌体，尽量将菌液倒干净；3•加入15（加1溶液I振荡打匀，重新悬浮细胞，震荡混匀（注意：应彻底打匀沉淀或碎块）；4.加入170卩1溶液II,轻柔颠倒混匀，放置至清亮，一般不超过5分钟；5.加入170卩1溶液III颠倒混匀，放置于冰上10分钟，使杂质充分沉淀；6.12000rpm4°C离心7分钟；7.

7、吸取上清液（注意：不要吸取到飘浮的杂质）至另一Eppendorf管中，加入等体积酚/氯仿/异戊醇，反复混匀，12000ipm离心5分钟。&移取上清夜人约500-550^1,加2倍体积乙醇，混匀，离心（12000rpm,5分钟），倒掉酒粘。离心数秒，用移液管尽可能除尽酒粘。9.用0.5ml70%的酒精洗DNA沉淀一次，离心2分钟，倒掉酒精；离心几秒，用移液器尽可能出去酒精，风干。10.加入25卩1的TE（含20ng/mlRNAase）溶液溶解DNA沉淀，既得质粒DNA溶液,-20°C保存备丿U。实验三DNA琼脂糖凝胶电

8、泳一、实验目的掌握DNA琼脂糖凝胶电泳的原理和基本操作。二、实验原理琼脂糖凝胶电泳是分离、鉴定和纯化DNA片段的常规方法。通常采用水平电泳，在强度和方向恒定的电场下进行电泳。DNA分子凶其双螺旋忡架两侧带有富含负离子的磷酸根残基，在凝胶缓冲液中带负电荷，在电场中由负极向正极迁移。不同的DNA分子因其所带电荷数、相对分子质量的大小和构彖不同，在同