实验方法总结材料2：细胞实验部分

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1、实用文档实验方法总结（2）：细胞生物学部分1.原代细胞分离与培养21.1原代细胞分离21.2原代细胞培养22.干细胞分离培养32.1胚胎干细胞诱导分化32.2肿瘤干细胞（CSC）分离鉴定33.细胞增殖相关研究方法53.1MTT分析法53.2XTT53.3WST-163.4CCK-8(WST-8)63.4平板克隆形成63.5软琼脂克隆形成73.6BrdU74.细胞转移相关研究方法84.1划痕8文案大全实用文档4.2细胞粘附84.3Transwell迁移94.4Transwell侵袭95.血管生成106.细胞周期：PI染色107

2、.细胞凋亡检测107.1AnnexinV/PI双染色法107.2TUNEL法117.3线粒体膜电位(MMP)检测128.细胞分选128.1流式分选128.2磁珠珠分选139.细胞转染1310.细胞慢病毒感染1411.基因稳定细胞株的筛选1412.耐药细胞株的筛选1513.细胞共培养1513.1直接共培养15文案大全实用文档13.2间接共培养151.原代细胞分离与培养1.1原代细胞分离人或动物体内（或胚胎组织）由于多种细胞结合紧密，不利于各个细胞在体外培养中生长繁殖，必须将现有的组织块充分散开，使细胞解离出来。第一，悬浮细胞的

3、分离方法组织材料若来自血液、羊水、胸水或腹水的悬液材料，最简单的方法是采用1000r/min的低速离心10min。经离心后由于各种细胞的比重不同可在分层液中形成不同层，这样可根据需要收获目的细胞。第二，实体组织材料的分离方法对于实体组织材料，由于细胞间结合紧密，为了使组织中的细胞充分分散，形成细胞悬液，可采用机械分散法（物理裂解）和消化分离法。其中，机械分散法的特点是简便、快速，但对组织机械损伤大，而且细胞分散效果差，适用于处理纤维成分少的软组织。而消化分离法是指把组织剪切成较小团块（或糊状），应用酶的生化作用和非酶的化学作

4、用进一步使细胞间的桥连结构松动，使团块膨松，由块状变成絮状，此时再采用机械法，用吸管吹打分散或电磁搅拌或在摇珠瓶中振荡，使细胞团块得以较充分的分散，制成少量细胞群团和大量单个细胞的细胞悬液，接种培养后，细胞容易贴壁生长。文案大全实用文档1.2原代细胞培养原代细胞的培养也叫初代培养，是从供体取得组织细胞在体外进行的首次培养，是建立细胞系的第一步。第一，组织块培养法组织块培养是常用、简便易行和成功率较高的原代培养方法。其基本方法是将剪成的小组织团块接种于培养瓶（或皿）中，瓶壁可预先涂以胶原薄层，以利于组织块粘着于瓶壁，使周边细胞

5、能沿瓶壁向外生长。第二，消化培养法第三，悬浮细胞培养法。对于悬浮生长的细胞，如白血病细胞、淋巴细胞、骨髓细胞、胸水和腹水中的癌细胞和免疫细胞无需消化，可采用低速离心分离，直接培养，或经淋巴细胞分层液分离后接种培养。第四，器官培养。器官培养是指从供体取得器官或组织块后，不进行组织分离而直接在体外的特定环境条件下培养。器官培养可保持器官组织的相对完整性，可用于重点观察细胞间的联系、排列情况和相互影响，以及局部环境的生物调节作用。2.干细胞分离培养2.1胚胎干细胞诱导分化文案大全实用文档首先将类胚体消化成单细胞，贴壁培养，于不同的

6、培养阶段添加不同种类和不同浓度的化学物质、条件培养基或细胞因子等诱导条件，直接促进ES细胞定向分化为某种特殊类型的细胞；或通过改变培养条件对某些类型的细胞分化起抑制作用，从而高效诱导目的细胞的分化。改变细胞的培养条件使ES细胞进行定向分化的基本策略有三种：一是向培养基中添加生长因子和化学诱导剂等；二是将ES细胞与其它细胞一起进行培养；三是将细胞接种在适当的底物上，以促使细胞中某些特定基因的表达上调或下降，从而引发细胞沿着某一特定谱系进行分化。体外诱导胚胎干细胞的物质有化学试剂诱导法、细胞因子诱导法和外源基因诱导法。化学试剂诱

7、导法：维甲酸（RA）、DMSO、β-磷酸甘油、维生素C(VC)、地塞米松、维生素K3(VK3)以及2，5-羟基维生素D3等化学试剂，都能诱导ES细胞定向分化为特定类型细胞。细胞因子诱导法：ES细胞在培养过程中对许多细胞因子具有很强的依赖性。增加或减少一种或几种细胞因子可影响ES细胞的增殖或分化。目前研究最深入的细胞因子主要有骨形成蛋白(BMPs)和成纤维细胞生长因子(FGF)等。外源基因诱导法：转基因法可以弥补细胞因子法的不足。其原理是使某个促分化基因在ES细胞中过度表达，从而调控ES细胞的分化。应用此方法之前，首先要确定决

8、定该细胞向不同方向分化的关键基因，其次还要确保在适宜的时间将此基因正确插入到ES细胞基因组序列上。2.2肿瘤干细胞（CSC）分离鉴定对于CSC的分离纯化主要有根据细胞表型特征和生物学特性而建立的两大类方法：文案大全实用文档第一类：依赖于细胞表面标志的分离方法造血系统肿瘤干细胞：正常造血干细