D-二聚体检测与应用.ppt

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1、D-二聚体的检测与应用威士达医疗有限公司单卫民2012.06.20内容提要一、D-二聚体的产生及技术现状二、D-二聚体检测试剂的要求三、标准化问题四、InnovanceD-Dimer试剂五、D-二聚体检测的临床应用六、D-二聚体检测结果的解释2D-Dimer检测技术的发展史1972年，Gaffney首先提出D-Dimer检测，可作为监测凝血性疾病的“有用的工具”。1983年，Rylatt等首先报道了用单克隆抗体（DD-3B6/22）检测D-Dimer（乳胶凝集法）。当时被誉为“金标准”。90年代，ELISA分析法、乳胶增强型免

2、疫分析法等。90年代末到本世纪初，免疫比浊法在凝血仪上实现了自动化检测。但D-二聚体片段异源性的问题被忽略了3凝血系统内源性凝血外源性凝血凝血酶原凝血酶FXIIIFXIIIa纤溶酶原纤溶酶纤维蛋白单体纤维蛋白原交联纤维蛋白FDPX,Y,D,E等碎片X′,Ｙ′,Ｄ,Ｅ等碎片DD,DXD,DD/E,YXD等复合物一、D-二聚体的产生纤溶系统纤溶凝固5所检测的D二聚体片段D-二聚体检测的技术现状□制备单克隆抗体，针对的只是某类型D-二聚体。□病理过程中可产生多种类型D-二聚体，由于不同检测试剂只测定其中某种类型，而非降解片段的全部，

3、因此各类试剂在对同一标本进行测定时，其敏感性显著不同。□目前，>30种检测方法（20余种单克隆抗体）被应用于临床，不同试剂间差异非常显著。□无统一的国际标准D-二聚体检验方法的演变□低敏方法导致许多病理状态无法及时反映。□《急性肺血栓栓塞症诊断治疗专家共识》中华内科杂志2010年1月。□推荐…高敏感度的方法□国际上目前已经开始逐渐推动高敏方法。□原方法敏感度低：阳性率低□新方法敏感度高：阳性率高□临床：与既往的使用经验不符8二、D-二聚体检测试剂选择●高度敏感性和NPV-(几乎)无假阴性●有明确的阈值（cutoff值）适用于2

4、4小时作常规分析可用于门急诊标本分析自动化检测操作步骤简易快速的报告时间定量检测,有标准、质控物经济9检测试剂盒目前市场上用于检测D-二聚体的试剂品种有很多种，大体上可分为两种情况：一种是以欧美产品为代表，主要用于DVT/PE排除筛查特点：灵敏度高，检测范围相对较窄。另一种是以日本产品为代表，主要是用于DIC诊断特点：灵敏度相对较低，检测范围较宽10VTE(DVT/PE)exclusionDICD-Dimer无统一的国际标准目前有超过30种检测方法和20多种单抗被使用。存在两种报告单位：D-dimer（DDU）和纤维蛋白原当量

5、(FEU)抗体对D二聚体不同片段有不同的亲和力不同的试剂有不同的干扰情况11三、标准化问题12美国临床实验室标准化协会（CLSI）H59-P推荐指南13D二聚体试剂标准——中国国家标准（讨论稿）4.2阴性预测值结合临床诊断的验前概率进行D-二聚体检测，其阴性预测值应不低于95%。4.3测试范围涵盖制造商提供的用于排除诊断的临界值的1/2到4倍的临床标本测定值。4.4线性D-二聚体试剂在测试范围内，线性相关系数应大于0.98。4.5精密度4.5.1重复性用正常质控血浆同日内重复测试所得结果的变异系数（CV）不超过15％，用高值异

6、常质控血浆同日内重复测试所得结果的变异系数（CV）不超过10％。……144.7报告方式D-二聚体的报告单位通常包括纤维蛋白原等量单位（FEU）和D-二聚体单位（DDU）两种形式。FEU是将D-二聚体的量用降解前纤维蛋白原分子的量来表达，因此，用FEU表达的D-二聚体的量相当于用DDU表达的1.7倍。在D-二聚体报告方式中还包括ng/mL、ug/mL和mg/L等形式，通常应该直接采用制造商提供的单位，不建议进行形式和量纲的转换15四、InnovanceD-Dimer检测试剂已通过美国FDA验证（FDA510K）明确可用于静脉栓塞

7、性疾病的排除，其阈值为0.5mg/LFEU已得到EHA，ICTH和日本病理学会接受2010年在中国成功注册1617检测原理全自动乳胶增强免疫比浊度法新一代单克隆抗体8D3检测系统Sysmex®CA-7000systemSysmex®CA-1500systemSysmex®CA-560systemCSseries18检测试剂抗体试剂：REAGENT乳胶颗粒包被低压冻干，需蒸馏水复溶稀释液：DILUENT液体，用于样本稀释、定标稀释有缓冲液作用添加剂：SUPPLEMENT液体，用于封闭非特异性抗体缓冲液：BUFFER液体，使信号增

8、强含有聚合碳水化合物的缓冲液19定标品与试剂批号匹配有不同系统的靶值冻干粉人血浆为基质，所含D二聚体浓度大约为4.4mg/LFEU定标曲线有效期6个月以上20定标范围:0.19–4.40mg/LFEU或更宽自动6点定标定标有效期达6个月以上样本每测试:8–15µL,单次检测检