生物：《实验》复习课件1(湖南师大附中).ppt

《生物：《实验》复习课件1(湖南师大附中).ppt》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、高三生物专题复习实验专题第二讲鉴定分离类实验检测生物组织中可溶性还原糖、脂肪和蛋白质DNA的粗提取与鉴定叶绿体中色素的提取和分离检测生物组织中可溶性还原糖、脂肪和蛋白质一、实验原理：1.可溶性还原糖＋斐林试剂砖红色沉淀2.脂肪＋苏丹Ⅲ橘黄色脂肪＋苏丹IV红色3.蛋白质＋双缩脲试剂紫色反应检测生物组织中可溶性还原糖、脂肪和蛋白质二、实验材料选用：1.可溶性还原糖含糖量较高，颜色较浅或近于白色的植物组织2.脂肪的鉴定富含脂肪（植物油）的种子,如花生、核桃、蓖麻等的种子3.蛋白质的鉴定豆浆、鸡蛋清稀释液。检测生物组织中可溶性还原糖、脂肪和蛋白质三、试剂：1.斐林试剂A液质量

2、浓度为0.1g/mL的NaOH溶液B液　质量浓度为0.05g/mL的CuSO4溶液2.双缩脲试剂A液　质量浓度0.1g/mL的NaOH溶液B液　质量浓度0.01g/mL的CuSO4溶液3.苏丹Ⅲ或苏丹Ⅳ检测生物组织中可溶性还原糖、脂肪和蛋白质四.注意：1.斐林试剂与双缩脲试剂的异同?（1）相同点:（2）不同点:都由NaOH和CuSO4组成用途不同CuSO4溶液的浓度不同使用原理不同使用方法不同颜色反应不同检测生物组织中可溶性还原糖、脂肪和蛋白质四.注意：2.反应过程中出现的颜色变化及其原因分别是什么？用斐林试剂鉴定还原性糖的实验浅蓝色─棕色─砖红色（沉淀）双缩脲试剂鉴定蛋白质

3、的实验无色─浅蓝色─紫色检测生物组织中可溶性还原糖、脂肪和蛋白质四.注意：3.使用双缩脲试剂时为什么B液只能加3－4滴而不能过量？若加入过量的试剂B，CuSO4在碱性环境中生成大量的蓝色Cu(OH)2沉淀，会遮盖实验中所产生的紫色，影响观察的效果。DNA的粗提取与鉴定阅读教材p54-561.提取DNA的方法2.以文字和箭头的形式表示DNA在不同NaCl中的溶解度，获得较纯的DNA的过程DNA的粗提取与鉴定一、提取DNA的方法:1.DNA和蛋白质等其他成分在不同浓度的NaCl溶液中溶解度不同。2mol/L的NaCl溶液使DNA充分溶解,使杂质析出0.14mol/L的NaCl溶液

4、使DNA析出,使杂质溶解。DNA的粗提取与鉴定一、提取DNA的方法:2.DNA不溶于酒精.但细胞中的某些蛋白质溶于酒精.利用这一原理.可将DNA与蛋白质进一步分离.3.DNA与杂质对酶、高温和洗涤剂的耐受性不同.蛋白酶能水解蛋白质,但对DNA没有影响.大多数蛋白质不能忍受60—80℃的高温,而DNA在80℃以上才会变性.洗涤剂能够瓦解细胞膜,但对DNA没影响。DNA的粗提取与鉴定二、DNA的鉴定在热水浴的条件下，DNA遇二苯胺会被染成蓝色。三、实验材料的选取选用DNA含量相对较高的生物组织DNA的粗提取与鉴定四、实验的过程1、破碎细胞，获取含DNA的滤液原理方法动物细胞植物细

5、胞细胞在低浓度溶液中吸水胀破鸡血细胞液中加入蒸馏水,玻棒搅拌,过滤后收集滤液洗涤剂瓦解细胞膜切碎的洋葱中,加入洗涤剂和食盐搅拌、研磨,过滤后收集研磨液DNA的粗提取与鉴定四、实验的过程1、破碎细胞，获取含DNA的滤液2、去除滤液中的杂质①DNA在不同浓度的NaCl溶液中溶解度不同。②DNA对酶的耐受性。③DNA对高温的耐受性。DNA的粗提取与鉴定→过滤含有DNA的氯化钠溶液①DNA在不同浓度的NaCl溶液中溶解度不同。滤液中加入2mol/L的NaCl溶液,溶解DNA→过滤除去不溶杂质→加蒸馏水,调节NaCl溶液浓度为0.14mol/L，析出DNA→滤取含DNA的粘稠物→加2m

6、ol/L的NaCl溶液溶解DNA粘稠物DNA的粗提取与鉴定滤液中加入嫩肉粉，反应10—15分钟，嫩肉粉中的木瓜蛋白酶能够分解蛋白质。②DNA对酶的耐受性。③DNA对高温的耐受性。滤液放入60—75℃的恒温水浴中保温，反应10—15分钟，使蛋白质沉淀而DNA分子未变性，再将DNA与蛋白质分离。DNA的粗提取与鉴定四、实验的过程1、破碎细胞，获取含DNA的滤液2、去除滤液中的杂质3、DNA的析出与鉴定在含有DNA的氯化钠溶液中，加入等量、冷却的95%酒精（溶解蛋白质等杂质），静置2—3分钟，溶液中出现白色丝状物，玻棒沿一个方向搅拌，卷起丝状物。小结：DNA的粗提取与鉴定1.三次过

7、滤过滤使用纱布目的一1—2层二多层三1—2层过滤用蒸馏水稀释过的鸡血细胞液过滤含黏稠物的0.14mol/LNaCl溶液过滤溶解有DNA的2mol/LNaCl溶液获得含核物质的滤液获得纱布上的粘稠物获得含DNA的滤液2.两次沉淀析出依据的原理第一次第二次DNA在氯化钠的物质的量浓度为0.14mol/L时溶解度最低DNA在冷却的95%的酒精中能沉淀析出小结：DNA的粗提取与鉴定3.两次加蒸馏水加蒸馏水的目的第一次第二次使血细胞破裂降低NaCl浓度使DNA析出小结：DNA的粗提取与鉴定归纳--某些物质的鉴定物