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1、,:,玉ItGoletla!JImmunolMetl一(》ds:277〔17〕Goldro,enMHetal:CaneerRe,39:〔〕91975.587197910eve,oneta:JImm。nolMethodongAeta:aneere,39:597,〔〕LSHl〔18〕TWlCR1日Tg:.oooneta:aneere,:IT163197T〔19〕ThmDMPlCR39:,allayJetalrJCaneer29:31,〔11〕HidWB6D41079:,19T4〔20〕O’ConnorRetalBr
2、JCaneer38:674:,2〕HoltPGetalCaneerRe。39:56419791978〔1::.3owellAetalCaneerReo39:5T01979〔21〕HallidayetalCaneerRe、37:1962〔1〕PWJ4〕Maui,eta:ellularImmuno〔1lhAElCl1977.:,17:1311975〔22〕lopezMetalBrJCaoeeer38:66015〕Thom,oneta:aneerReo39:〔DMPlC1078.:,5761979〔23〕Sanner
3、TetalCaneerRe、39:6541979::,16〕MartiJHetalInternJCaneer18:48〔24〕Goldra、enMHCaneerRe,39:66010了9〔1976免疫活性细胞的分离纯化上海第二医学院上海市免狡学研究所朱炳法邵国英综述余布陆德源审阅、。,免疫活性细胞是指能特异地识别抗原能达到要求近年来由于细胞免疫涉及肿随后分化增殖、产生抗体或淋巴因子、从而瘤免疫、移植排斥反应、抗感染等现代医学。发挥特异性免,疫反应的一类细胞群按此定中的几个重大课题而在进行细胞免疫研究,。义只有T
4、及B细胞刁属于免疫活性细胞,,,几前必须分离纯化免疫活性细胞因此,,、然而近年来发现的其他几类淋巴细胞也参年来国内外探索出许多分离纯化免疫活,K细胞、NK细胞及D细胞,,与免疫反应如性细胞的方法这些方法大部分是根据细胞、。有人将这三种淋巴细胞也归入免疫活性细的表面标志理化性状及功能而设计的。胞由于单核一巨噬细胞在非特异与特异免,因此有人(一)静t或低速离心疫中均起着重要作用亦将其列入。免疫活性细胞中将肝素抗凝血(10国际单位/毫升)置免疫活性细胞的分离纯化主要是淋巴细,,1针筒中针尖向上静置小时左右红细胞。`,
5、一,,胞的分离纯化其纯度随实验要求而异沉至下层血浆层内含较多的白细胞在红,。般细胞免疫实验如巨噬细胞移动抑制试细胞之上的白色层中白细胞数量更多将血,混合淋巴,,验细胞反应等只须静置或低速浆及白色层小心推入试管洗涤后计数即可。,。离心即可应用但有些难度较高的实验如使用T细胞亚群的功能,,免疫活性细胞受体或表肝素抗凝血注入离心管后置37℃1小,,100,面标志的研究等则必须具有很高的纯度才时9离心10分钟吸出红细胞上面的白一287一,。色层亦可分离出淋巴细胞2YZ一og(QQ)沉降速度=用静置或低速离心分离的纯度差
6、,不仅:)0月一`!,、丫l’〔。示含免疫活性细胞而且还混杂单核细胞血仗颗本卜径之人月几浓液比服。Q表示颗粉比币g人小离心力,且所需时小板及粒细胞但由于操作简便,1表小溶液的绝对卿度,,l旬较短细胞活性较好适用于一般细胞免,(1’.l农示形状囚子即颗木的冷擦系数与Jt问容积的颗。疫实验字立摩擦系数的比值,从沉降速度公式中可以看出的颗粒体eatin’6(二)3%明胶(gl)及%右,积越大(Y越大)其与溶液的比重差越人(Q“旋籍醉分离法一o),Q越大在一定离心场中的离心力越大3%明胶溶液1(,。、份加肝素抗凝血或脱
7、纤g越大)那么其沉降的速度就越快粒细胞,维血3份混合后置37c30分钟吸取上层细单核细胞及接触高分子聚蔗糖后的红细胞的,。,胞悬液洗涤即可积比巴大休均淋细胞故这些细胞的沉降速一6%右旋糖醉extran7、40,。(D分子量度也快因此能分离到纯净的淋巴细胞,40万的高分子效果更好万均可)与等量肝密度梯度离心分离纯化淋巴细胞的操作c30分钟,。素抗凝血或脱纤维血混匀后置37方法也比较简便将肝素抗凝血用HBSS或。,「层再加等量6%右旋糖3,吸取上层细胞悬液生理盐水稀释1、倍充分混匀后沿管壁。Han1.5、2.0,醉
8、重复一次收集的细胞悬液经ks平衡加至毫升分离液上面务必形成清anksBaaneedSalsoution,,盐溶液(Hltl楚的两层而后以1500转/分水平离心20分。HBSS)洗涤二次即可应用4009),钟(约此时试管可明显地出现五层、、。,本法也混杂较多的粒细胞单核细胞(图1)仔细吸去最上层血浆后再吸取,。血小板及红细胞故纯度为60、70%·23(三)密度梯度离心HBSS稀释的、血浆
