天然药化芦丁实验讲义.doc

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1、芦丁的提取与鉴定实验讲义一、实验目的芦丁（Rutin）广泛存在于植物界中，尤以槐花米（为植物sophorajaponica的末开放的花蕾）和荞麦中含量最高，可作为大量提取芦丁的原料。本实验采用碱提取一酸沉淀方法从槐花米提取芦丁，以芦丁为实例学习黄酮类成分的提取分离方法及鉴定方法。图中红色数字表示2′、3′、4′,位芦丁属于黄酮类化合物5位羟基和4位羰基形成氢键，酸性较弱，7位和3′、4′位存在羟基酸性较强，根据碱提酸沉的原理提取，芦丁酸性较强，用弱碱提取）二、实验原理芦丁是由槲皮素（Quercetin）3位上的羟基与芸香糖连结而成的苷，依据芦丁结构中含有酚羟基，能与

2、碱反应，生成盐而溶于水中，向此盐溶液中加入酸，则芦丁游离析出。三、材料及设备槐花米，硼砂，石灰乳，浓盐酸，纱布，布氏漏斗，搪瓷盘，烧杯，pH试纸，玻璃棒，电炉，无水乙醇，正丁醇，醋酸，氨水，紫外分光光度计，层析滤纸，薄层板，层析展缸四、实验过程1、芦丁的提取、及水解取槐花米40g，置于1000ml烧杯中，用冷水快速清洗去泥沙等杂质沥干水，加0.4%硼砂水溶液（弱碱性溶液）400ml，pH6~7左右，在搅拌下以石灰乳调至pH8，加热微沸30分钟，用纱布过滤，重复操作一次，合并滤液（碱提），用浓盐酸调pH至5,（酸沉，酸性不易过强，否则会导致析出的芦丁1位上的氧在强酸条

3、件下和酸形成钅羊盐后又溶于水中导致产率降低）放置过夜，抽滤，水洗3～4次，放置空气中自然干燥得粗芦丁。2、粗品芦丁精制取粗芦丁2g，加乙醇50~60ml加热溶解（溶解后粗品中的粘性多糖、鞣质、粘性物质、杂质不溶于醇，可过滤除去，醇一般过量，多加机倍醇，边加醇边视粗品溶解情况而定，不易猛然过量否则造成浪费），乘热抽滤（乘热抽滤是为了防止溶于醇中的部分芦丁手冷析出导致产率下降，可提前将抽滤瓶和布氏漏斗在烘箱中烘热，）将滤液浓缩至约20~30ml，放置析出结晶。（过滤即得芦丁精制品）4、纸层析鉴定准备层析滤纸和薄板，配置展开剂（正丁醇-醋酸-水=4:1:1），与标准品对照

4、展开，可见光下观察，再在紫外光下观察，经氨气后再观察。展开剂不能没过基线，防止将芦丁溶于展开剂中，展开后烘干或吹干后，薄层板上显微黄色，在紫外灯线观察，标准品对照组、交叉点样组、样品组三组在同一条直线上，Rf相等，三组展开后，各出现单个显色点，说明提取得到的芦丁为纯品。