AngⅡ对高血压患者肠系膜动脉血管平滑肌细胞BKCa的影响及与AT2R表达的相关性研究.pdf

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1、目录1AngII对高血压患者肠系膜动脉血管平滑肌细胞B＆a的影响及与AT2R表达的相关性研究⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯l1．1中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯11．2英文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯51．3前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯10材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯141．5结果⋯···⋯···⋯⋯⋯···⋯···············⋯⋯⋯⋯···⋯·一．⋯⋯261．6讨论·····································

2、·········⋯················⋯·371．7结论··············-⋯⋯·····················⋯⋯·····················451．8参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯461．9英汉缩略词对照表⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯522致谢·····································································543血管紧张素II2型受体在心血管系统的研究进展(综述)······0

3、@0···························@00OOO·····-···············OOgO@DO0···55AngII对高血压患者肠系膜动脉血管平滑肌细胞BKca的影响及与AT2R表达的相关性研究事摘要目的：高血压(hypertension，HT)是危害人类健康的心血管常见病和多发病，其基本病理特征是阻力动脉的张力持续增加。血管平滑—／、肌细胞(vascularsmoothmusclecells，VSMCs)上的离子通道参与了血管张力的调节，其中大电导钙激活钾通道(1argeconductance

4、calcium—activatedpotassiumchannels，BKca)的开放是血管平滑肌舒张的重要机制，呈现负反馈调节方式。血管紧张素II(angiotensinII，II)作为一种有效的内源性缩血管活性物质，通过血管紧张素II1型受体(angiotensinIItype1receptor，ATlR)发挥收缩血管的作用；然而近年来却发现，AngII可以舒张肠系膜动脉。研究证实AngII通过作用于血管紧张素II2型受体(angiotensinIItype2receptor，AT2R)，引起BKca的开放，导致细胞膜超极

5、化，进而舒张肠系膜动脉。这样就提出了一个关于AngII的非内皮依赖的血管舒张作用的新观点，它对我们深入理解高血压的发生和发展机制有重要的意义。因此，探讨在高血压的情况下，AT2R表达的变化以及由此是否引起B＆a对AnglI反应性的改变是有必要的。本实验采用单通道膜片钳技术和免疫印迹法(Westemblot)，探讨AngII的作用机制及其与AT2R和高血压之间的关系，为阐明其扩张肠系膜动脉的机制及AT2R的血管保护性作’国家自然科学基金资助项目(№：30670763)用提供实验依据。方法：(1)单通道膜片钳实验：2l例接受腹部手

6、术的患者分为两组：高血压(HT组)未长期规律服用抗高血压药的8例、正常血压(NT组)13例，分离其肠系膜动脉，纵向剖开剪成2mmx2mm的组织条块，置于酶液中进行两步消化。选取立体感较强，表面光滑的平滑肌细胞进行实验，在对称性高钾溶液中，采用膜片钳细胞贴附式和内面向外式记录BKca电流。电流信号经膜片钳放大器CEZ．2200放大，滤波处理后输入计算机，经pClamp6．0软件采集电流，Clampfit10．1软件系统进行数据分析。血管平滑肌细胞先经ATlR阻断剂缬沙坦10州预处理10分钟后，分别观察在细胞贴附式和内面向外式膜片

7、下AngII对B＆a的作用，比较AngII对NT组和HT组BKca电流的作用及AT2R是否介导了AngII对BKca的激活。(2)Westemblot检测AT2R的蛋白水平：27例接受腹部手术的患者分为两组：高血压(HT组)14例(其中未长期规律服用抗高血压药的6例，长期规律服用抗高血压药的8例)、正常血压(NT组)13例，取其切除的肠系膜动脉加入裂解液提取总蛋白，BCA法测定提取的蛋白浓度。每孔上样蛋白量为30嵋，选择合适电压进行SDS—PAGE电泳和转印。用AT2R兔抗人单克隆抗体(1：800)孵育。洗膜后再加入辣根过氧化

8、物酶标记的羊抗兔IgG二抗(1：5000)进行孵育。凝胶图像用QuantityOne软件分析，其中AT2R蛋白的表达水平用GAPDH蛋白的表达量来校正。结果：(1)急性酶分离的人肠系膜动脉平滑肌细胞BKca单通道电流的特性：①B＆a单通道电流具有较高的电导，其电导值为220．