海燕体壁胶原蛋白提取工艺的初步研究.pdf

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1、第26卷第1期2011年2月大连海洋大学学报JOURNALOFDALIANOCEANUNIVERSITYV01．26No．1Feb．20l1文章编号：2095—1388(2011)01—0054—04海燕体壁胶原蛋白提取工艺的初步研究刘远平，张琳琳，张慧怡，赵丹，马然，汪秋宽(大连海洋大学辽宁省水产品加工及综合利用重点开放实验室，辽宁大连116023)摘要：采用两种不同的方法从海燕Asterinapectinifer口体壁中提取出酸溶性胶原蛋白(ASC)和胃蛋白酶促溶性胶原蛋白(PSC)。结果表明：ASC的最佳反应条件是，温

2、度为lO℃，提取液种类为乙酸一乙酸钠溶液，提取液浓度为0．5mol／L，提取时间为72h，ASC得率为7．93％；PSC的最佳反应条件是，温度为17℃、胃蛋白酶酶加量为4％、提取时间为96h，PSC得率为49．61％。经紫外光谱和氨基酸组成分析，结果表明，ASC和PSC均为典型的I型胶原蛋白。关键词：海燕；酸溶性胶原蛋白；酶促溶性胶原蛋白；提取工艺中图分类号：$986文献标志码：A胶原蛋白是动物结缔组织的主要成分，是动物体内含量最多、分布最广的蛋白质。胶原蛋白广泛存在于动物的皮肤、骨骼、牙齿、韧带和血管中，起着支撑器官、保护

3、机体的功能⋯。胶原蛋白现已广泛应用于食品、化妆品、营养保健品、生物肥料以及医用材料等领域拉J。牛、猪的皮和骨中的胶原蛋白一直作为工业用胶原蛋白的主要来源。近年来，由于哺乳动物疫病的爆发和人畜共患病的增加，使其安全性受到了怀疑。世界各国都在积极寻找更安全的胶原蛋白来源，从水生动物中提取安全、卫生、无公害的胶原蛋白已成为各国研究的热门课题。国内外对鱼类胶原蛋白的研究较深入‘3。5】，关于无脊椎动物如海蛰‘6l、海参‘7。9l、多棘海盘车¨叫胶原蛋白的研究也有报道，但尚未见关于海燕胶原蛋白研究的报道。海燕Asterinapecti

4、nifer(z俗称海星，属海星纲有棘目海燕科，常见于中国黄海、渤海一带，是分布广泛的海洋生物资源之一[11

5、。海燕的体壁较宽厚，韧性极强，含有丰富的胶原蛋白。本研究中，作者对海燕体壁胶原蛋白的提取工艺进行了初步研究，旨在为其胶原蛋白的开发利用提供参考。1材料与方法1．1材料将新鲜海燕(大连獐子岛渔业集团提供)去内脏，冲洗干净，冷冻备用。胃蛋白酶购自Sigma公司，浓盐酸、冰醋酸、乙酸钠均为分析纯。1．2主要仪器与设备主要仪器有：FD一4冷冻干燥机、FJ一300一S高速均质机、GL一21M冷冻离心机、uV一754分光光度计。1

6、．3方法1．3．1原料预处理将海燕体壁破碎后浸泡于0．4mol／L的盐酸溶液中，搅拌，每日更换盐酸一次，至海燕体壁变软后用清水漂洗至pH为5．0。将漂洗后的海燕体壁浸泡于0．3mo[／L的NaOH溶液中，每隔2h更换一次溶液，搅拌6h，漂洗至pH为8．0，用高速均质机匀浆，真空冷冻干燥。以上操作均在4oC以下进行。1．3．2酸溶性胶原蛋白的提取准确称取9份同等质量经预处理的海燕体壁，加入提取液进行提取(埘(海燕体壁)：lt，(提取液)=l：20)，以提取液种类、反应时间、提取液浓度和温度为试验因素进行酸解正交试验。提取完成后

7、，将混合物以5000r／min离心30min；向上清液中加入NaCl使终浓度达到2．5mol／L，静置24h后以10000r／rain离心30rain，将沉淀物透析脱盐后冷冻干燥，收稿日期：2010—03—11基金项目：农业部“948”项目(2006一G44)作者简介：刘远平(1984一)。男，硕士。E—mail：yupylau@126．com通信作者：汪秋宽(1962一)．女，教授。E—mail：wqk320@diou．edu．cn第l期刘远平，等：海燕体壁胶原蛋白提取工艺的初步研究55即得酸溶性胶原蛋白(ASC)。ASC

8、正交试验因素和水平如表1所示。表1酸溶性胶原蛋白正交试验因素水平表Tab．1Thefactorandleveltableintheorthogonalexperi—mentofASC1．3．3酶促溶性胶原蛋白的提取准确称取9份同等质量经预处理的海燕体壁，用最佳酸溶性胶原蛋白提取工艺进行提取。离心后分别向沉淀物中加入0．5mol／L乙酸溶液(t‘J(沉淀物)：埘(乙酸)=1：20)。以溶液反应时间、温度和酶加量为试验因素进行酶解正交试验，试验操作方法同ASC操作，即得酶促溶性胶原蛋白(PSC)。PSC正交试验因素和水平如表2所

9、示。表2酶促溶性胶原蛋白正交试验因素水平表Tab．2Thefactorandleveltableintheorthogonalexperi-mentofPSC1．3．4胶原蛋白的纯化将ASC和PSC粗制品溶于0．5mol／L乙酸溶液中，分别注人透析袋，于4℃下透析，每隔6h换水1次，透析7