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1、摇南京农业大学学报摇2011,34(1):113-117摇JournalofNanjingAgriculturalUniversityhttp://nauxb.njau.edu.cn試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試刘倩,唐泰山,廉慧锋,等.副结核分支杆菌Hed蛋白的抗原性分析及在间接ELISA中的应用[
2、J]郾南京农业大学学报,2011,34(1):113-117副结核分支杆菌Hed蛋白的抗原性分析及在间接ELISA中的应用12322*1刘倩,唐泰山,廉慧锋,王凯民,张常印,雷治海(1郾南京农业大学动物医学院,江苏南京210095;2郾江苏出入境检验检疫局,江苏南京210001;3郾山西出入境检验检疫局,山西太原030024)摘要:从副结核分支杆菌K-10菌株克隆出840bp的hed基因片段,插入原核表达载体pET鄄32a(+),转化至Escherichiacoli-1BL21(DE3),在0郾8mmol·LIPTG诱导下进行表达,纯化重组蛋白,将其进行Western鄄blot分析、小鼠免
3、疫试验,包被ELISA板,建立间接ELISA方法。结果显示:重组蛋白具有良好的抗原性,方阵滴定法确定了间接ELISA方法的抗血清最佳稀释-1度(100倍)和抗原包被浓度(4郾4滋g·mL),该方法具有较好的特异性和敏感性。关键词:副结核分支杆菌;Hed蛋白;抗原性分析;间接ELISA+中图分类号:S852.618摇摇摇摇文献标志码:A摇摇摇摇文章编号:1000-2030(2011)01-0113-05AntigenicityanalysisoftheMycobacteriumparatuberculosisHedproteinanditsapplicationinindirectELISA
4、12322*1LIUQian,TANGTai鄄shan,LIANHui鄄feng,WANGKai鄄min,ZHANGChang鄄yin,LEIZhi鄄hai(1郾CollegeofVeterinaryMedicine,NanjingAgriculturalUniversity,Nanjing210095,China;2郾JiangsuEntry鄄ExitInspectionandQuarantineBureau,Nanjing210001,China;3郾ShanxiEntry鄄ExitInspectionandQuarantineBureau,Taiyuan030024,China)Ab
5、stract:TodetectantigenicityofHedproteinofMycobacteriumparatuberculosis(Map),andestablishtheELISAdiagnosis,hedgenewasclonedfromMycobacteriumparatuberculosisK鄄10,andinsertedtopET鄄32a(+)vector.TherecombinantplasmidwastransformedintocompetentEscherichiacoliBL21(DE3).Therecombinantproteinwasexpressed,p
6、urified,anddetectedbyWestern鄄blotandthemiceimmunologictest.AfterthatitwasappliedinindirectELISA.Theresultsshowedtherecombinantproteinspossessedthegoodantigenicity.TheELISAassaybasedonHedproteinwasmorespecificandsensitive.Keywords:Mycobacteriumparatuberculosis;Hedprotein;antigenicityanalysis;indire
7、ctELISA副结核分支杆菌(Mycobacteriumparatuberculosis,Map)是引起牛、羊、羊驼等动物副结核病的病原。副[1]结核病自1895年首次被报道后,现已广泛流行于世界各国。2002年,韩国某地区调查研究显示162个[2]奶牛场中存在副结核病流行;在我国该病分布广泛,感染率在近年有上升趋势,部分地区甚至达[3]44郾8%,严重危害着畜牧业发展。目前,副结核病尚无特效治疗方法或药物。对于副结核病
