农杆菌介导的花魔芋遗传转化体系的优化-论文.pdf

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1、安徽农业科学，JournalofAnhuiAgri．Sci．2015，43(5)：21—24责任编辑李占东责任校对李岩农杆菌介导的花魔芋遗传转化体系的优化陈磊，郭政宏，程海丽，乐超银(三峡大学生物技术研究中心，湖北宜昌443002)摘要[目的]探讨魔芋愈伤组织培养基、不同转化条件(菌液浓度、侵染时间、预培养时间及共培养时间)及转化植株的筛选条件(抗生素浓度和乙酰丁香酮(As)浓度)等因素对转化效率的影响。[方法]采用卡那霉素抗性基因为选择标记，对农杆菌介导的花魔芋遗传转化体系进行优化。[结果]在预培养2d，用0D为0．6的菌液侵染30min、共培养3d，卡那霉素100m

2、g／L，羧苄青霉素250mg／L，AS浓度100i~mol／L的条件下能有效提高转化效率。再生花魔芋植株经GUS染色及PCR检测，结果表明外源目的基因已经整合到花魔芋基因组中。[结论]为魔芋抗病品种的转基因培育，丰富其种质资源，寻找抗病新途径提供理论依据和试验基础。关键词花魔芋；农杆菌；遗传转化体系中图分类号S188文献标识码A文章编号0517—6611(2015)05—021—04OptimizedGeneticTransformationSystemofAmorphophallus~njacMediatedbyAgrobacte~umtumfaciensCHENLe

3、i，GUOZheng-hong，CHENGHai-Ii，YUEChao·yin(BiotechnologyResearchCenter，ThreeGorgesUniversity，Yichang，Hubei443002)Abstract[Objective]FactorsthatinfluenceAgrobacteriumtumfaciens—mediatedtransformationofAmorphophalluskonjac，includingculturemedium，transformationconditionsandselectionreagentswer

4、einvestigated．[Method]AntransformationsystemmediatedbyAgrobacteriumtumfacienshasbeenoptimizedtoobtaintransgenicplantsofAmorphophalluskonjacbyusingkanamycinresistancegeneasmarkergene．[Re—suit]Theresultsshowedthatpreculturefor2daysbeforeinfectionbyAgrobacterium(OD㈣=0．6，30min)andthencocuhur

5、efor3daysyiel—dedthehighestrateofantibioticresistantcallusformationwiththeadditionofkanamycin(100mg／L)，carbenicillin(250mg／L)andaccto—syringone(100Ixmol／L)．Thetransgenicplantswerescreenedandre—clarifiedbyGUSstainingandPCRanalysisthattheexogenousgenewasintegratedintoAmorphophalluskonjacge

6、nome．[Conclusion]Thestudyprovidedtheoreticalbasisandexperimentalbasisforcultivatinggeneti—callyresistantvarieties，richinggermplasmresourcesandfindingnewwaysfordiseaseresistance．KeywordsAmorphophalluskonjac；Agrobacteriumtumfaciens；Genetictransformationsystem魔芋(Amorphophallus)属天南星科(Areacea

7、e)魔芋属多报道。张兴国等采用RT—PCR方法从白魔芋组培苗的幼年生草本植物，其变态茎宿存于地下，通常呈球形、扁球形或嫩球茎组织中克隆到ADP一葡萄糖焦磷酸化酶大亚基基因。柱状球形⋯，主要栽培种为花魔芋Amorphophalluskonjac)和周盈等初步建立了农杆菌介导花魔芋遗传转化体系，但并白魔芋(Amorphophallusalbus)。魔芋块茎内富含葡甘聚糖未进行转化条件的优化及后续感病试验来验证转基因魔芋(Konjacglucomannan)、各种人体必需氨基酸和微量元素J。的抗软腐病能力。葡甘聚糖可广泛用于食品、医药、保健、农