胚胎原位杂交技术.doc

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1、胚胎原位杂交技术通过分析mRNA在不同发育时期组织屮的表达变化，有助于了解胚胎发育的基因调控机制。原位杂交是研究胚胎基因表达的常用方法，在发育生物学研究屮起重要作用。胚胎原位杂交包括全胚胎原位杂交和胚胎组织切片原位杂交。全胚胎原位杂交技术(wholemountinsituhybridization)可以从整体水平反.映胚胎发育过程中基因表达的时空顺序，是一种广泛应用于胚胎发育调控基因表达研究的技术。该技术实验步骤少，简单易行，大量减少了分析所需时间。全胚胎原位杂交成功的关键因索是进行适当的蛋片酶K处理。使用不同探针时，应摸索不同的蛋白酶K浓

2、度、处理时间和温度。全胚胎原位杂交实验屮。经常会出现背景信号太强或信噪比太低的情况。产生这些情况的原因，通常是由于探针或抗体滞留于胚胎体腔和体室以及杂交后漂洗的条件不够严格等。杂交预处理前，将胚胎在解剖镜下用细针在脑室、颈背部、颌面部和心室等处刺孔，以使反应后的探针或抗体不在这些-部位滞留。并在漂洗时充分洗除。同时。杂交厉使用RNA酶充分消化未杂交的标记RNA探针，提高杂交后漂洗的严格度，抗体反应后充分漂洗均能降低背景信号，提髙信噪比。対较大的胚胎标本來讲，探针很难穿透報个组织.因此需切成切片后进行杂交即胚胎组织切片原位杂交，以克服全胚胎原

3、位杂交方法中探针不能渗入到胚胎深部的问题。