LAMP快速检测犬传染性肝炎方法的建立及应用-论文.pdf

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1、2014年第31卷第8期LAMP快速检测犬传染性肝炎方法的建立及应用曹丙蕾，凌宗帅，邱洪凯(1．济南出入境检验检疫局，山东济南250014；2．山东正邦养殖有限公司，山东济南250010)摘要：根据GenBank上公布的犬腺病毒I型(CAV-I)E3基因序列，设计了3对特异性环介导等温扩增(LAMP)引物，以CAV-IDNA为模板，通过条件优化建立了犬传染性肝炎LAMP快速检测方法，该方法能够在63℃恒温下30min内实现目的核酸的大量扩增，在可见光下即可直接观察扩增产物荧光颜色变化来判定结果。特异

2、性和灵敏度试验表明，该LAMP检测方法只对CAV-I有特异性扩增，对其他无关核酸无扩增。与常规PCR检测相比，LAMP的检测灵敏度较好，最低检出限为10～TCID是PCR检测方法的100倍。临床样品检测结果表明，LAMP阳性检出率为36％，与病毒分离鉴定的结果符合率达96．8％，与PCR检测的结果符合率达100％，且快速简便，成本低，适用于基层实验室的快速疾病诊断。关键词：LAMP；犬传染性肝炎；犬腺病毒I型中图分类号：$855．3文献标识码：A文章编号：1005—944X(2014)08．0073

3、．04EstablishmentandApplicationofLAMPfortheRapidDetectionofInfectiousCanineHepatitisCaoBinglei，LingZongshuai，QiuHongkai(1．JinanEntry—ExitInspectionandQuarantineBureau，Jinan，Shandong250014；2．ShandongZhengbangBreedingGroupCO．，LTD．，Jinan，Shandong250010)Abs

4、tract：Todeveloparapidmethodforthedetectionofinfectiouscaninehepatitis，LAMPwasestablishedusingthreepairsofspecificprimersfortheE3geneofCAV—IaccordingtothesequencesinGenBank．Theassaywasoptimizedtoobtainabigamountofamplificationproductsat63℃for30minandthe

5、amplificationproductscouldbeobservedbythenakedeyes．ItwasshownthattheLAMPwasabletospecificallyamplifyCAIDNA，withoutcross-reactionwithOtherirrelevantnucleotidesanditwas100timesmoresensitivethanPCRassaywithalowestdetectionlimitvalueof10TCIDn／0．1mL．Thedete

6、ctionofclinicalsamplesshowedthatthepositiverateofLAMPwas43％．Inaddition，theagrcementratebetweenLAMPandthevirusisolationwas96．8％butbetweenLAMPandPCRwasupto100％．LAMPwasmoresensitiveandsimpleandcouldbeappliedtorapiddiagnosisofCAI．Keywords：LAMP：infectiousca

7、ninehepatitis：canineadenovirusI犬传染性肝炎(infectiouscaninehepatitis，ICH)蓝眼病)[3-4]o该病以刚断乳到一岁以内的幼犬感是由犬腺病毒I型(canineadenovirusI，CAV_I)染率和死亡率为最高，死亡率可高达400／0[2]。本病感染引发的犬的一种急性败血性传染病。该病于在世界范围内流行，既严重威胁着家养宠物的身体1925年首次被发现]，1984年，我国首次分离到健康，又对我国养犬业、皮毛动物养殖业等危害较该病毒，CAV-I

8、在临床上可导致犬传染性肝炎、狐大，给养犬业和宠物爱好者带来巨大的经济损失。狸和熊脑炎等疾病的发生[2】。临床上以肝小叶中心突然发病和出血时间延长是犬传染性肝炎的暗坏死、肝实质细胞和皮质细胞核内出现包涵体以及示，重症病例初期与犬瘟热极为相似，仅靠临床症出血为特征，常引起急性坏死性肝炎和角膜混浊(即状和病理变化难以进行鉴别诊断，确诊尚需依赖于实验室特异性诊断，如病毒分离、血凝抑制试验及基金项目：国家质检总局项目科技计划项目(2012IK015)通讯作者：曹丙蕾，E—mai