H5亚型禽流感病毒LAMP快速检测方法的建立-论文.pdf

《H5亚型禽流感病毒LAMP快速检测方法的建立-论文.pdf》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、第36卷第2期中国预防兽医学报Vo1．36．No．22014年2月ChineseJournalofPreventiveVeterinaryMedicineFeb．2014doi：10．39698．issn．1008—0589．2014．02．06H5亚型禽流感病毒LAMP快速检测方法的建立包红梅，李一经，王秀荣，陈化兰(1．中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室／农业部动物流感重点开放实验室，黑龙江哈尔滨150001；2．东北农业大学动物医学学院，黑龙江哈尔滨150030)摘要：为建

2、立快速检测H5亚型禽流感病毒(AⅣ)的方法，本研究根据GenBank中登录的H5亚型AIVHA基因序列，设计了一套特异识别HA基因序列中6个不同区段的环介导恒等温扩增(LAMP)引物，建立了基于LAMP技术检测H5亚型AIV的检测方法。结果表明，该方法对H5AIVRNA的最小检测限为0．1pfu，灵敏度高于普通一步法RT．PCR10倍；扩增反应可以在30min内完成；在反应体系中添加钙黄绿素(FD)荧光染料后，可以通过肉眼观察有无荧光直接判定结果。灵敏性及特异性试验表明，该方法灵敏度高、特异性好，能够

3、作为H5亚型A1V的病原学快速检测方法。关键词：禽流感病毒；LAMP方法；H5亚型禽流感病毒中图分类号：$852．65文献标识码：A文章编号：1008．0589(2014)02．0107．04Developmentofaloop—mediatedisothermalamplificationmethodfordetectionofsubtypeH5avianinfluenzavirusBAOHong-mei，LIYiding2，WANGXiu—rong，CHENHua—lan(1．KeyLaborat

4、oryofAnimalInfluenzaoftheMinistryofA鲥cultural，StateKeyLaboratoryofVeterinaryBiotechnologyHarbinVeterinaryResearchInstitute，ChineseAcademyofAgriculturalSciences，Harbin150001，China；2．CollegeofVeterinaryMedicine，NortheastAgriculturalUniversity，Harbin150030

5、，China)Abstract：InordertodeveloptherapiddetectionmethodforH5subtypeavianinfluenzavires(AIV)，aloop—mediatedisothermalamplification(LAMP)forthedetectionofH5subtypeA1VwasdevelopedwithasetofspecificprimersweredesignedbasedonthesequencesofH5subtypeAIVhemaggl

6、utinin(HA)geneavailableinGenBank，targetingthe6distinctsequencesofgenes．TheresultsshowedthattheLAMPwasspecifictoamplificationfromH5subtypeA1V，butnotfromothersubtypeA1Vsandotheravianvirus，andthedetectionlimitoftheLAMPmethodwas0．1pfuforH5subtypeAIV，whichwa

7、s100一foldhigherthanthatofroutineone-stepRT-PCR．Theamplificationcouldbecompletedwithin30mininawaterbothatconstanttemperatureof62．5℃．Withtheadditionofafluorescentdye，theresultswereeasiertobeinterpreted．Therefore。thesensitivityandspeciflcityLAMPmethodcould

8、beappliedforepidemiologicalsurveyandclinicaldiagnosisforH5subtypeAIVinfection．Keywords：avianinfluenzavires；loop—mediatedisothermalamplification(LAMP)；H5subtypeavianinfluenzavirus*Correspondingauthor收稿日期：2013．07．12基金项目：中央级公益性科研院所基