鸡滑液支原体LAMP快速可视化检测方法的建立-论文.pdf

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1、第36卷第1期中国预防兽医学报Vo1．36．NO．12014年1月ChineseJournalofPreventiveVeterinaryMedicineJan．2014doi：10．3969~．issn．1008—0589．2014．01．12鸡滑液支原体LAMP快速可视化检测方法的建立邓显文，谢芝勋，谢志勤，刘加波，庞耀珊，谢丽基，范睛，罗思思f广西兽医研究所广西畜禽疫苗新技术重点实验室，广西南宁530001)摘要：为建立能够快速检测鸡滑液支原体(Ms)的检测方法，本研究根据GenBank中MS热休克ATP依赖蛋白酶基因

2、的保守序列，设计了一套特异性环介导等温扩增(LAMP)引物，建立了MS的LAMP可视化检测方法。该方法的敏感性可达10z拷贝DNA，高于常规PCR方法lO倍；全部反应可以在1h内完成；可以通过肉眼观察钙黄绿素颜色变化直接判定结果；对其它常见病原体的检测结果均为阴性。结果表明建立的LAMP方法简便、快速、灵敏、特异，可以用于MS感染的快速检测。关键词：鸡滑液支原体；LAMP；检测中图分类号：$852．6文献标识码：A文章编号：1008-0589(2014)01-0046—04Developmentofaloop—mediate

3、disothermalamplificationassayforvisualdetectionofMycoplasmasynoviaeDENGXian．wen，XIEZhi—xun，XIEZhi—qin，LIUJia-bo，PANGYao—shan，XIELidi，FANQing，LUOSi—si(GuangxiVeterinaryResearchInstitute，GuangxiKeyLaboratoryofAnimalVaccinesandNewTechnology，Nanning530001，China)Abstrac

4、t：ToestablishrapiddetectionmethodforMycoplasmasynoviaedetection，aloop—mediatedisothermalamplification(LAMP)assaywasdevelopedwithasetofprimersdesignedaccordingtotheconservativesequenceoftheheatshockATP—dependentproteasegeneofM．synoviaeinGenBank．Undertheoptimizedreac

5、tionconditions，theamplificationcompletedwithinonehourinaconstantwaterbathat62℃．ThedetectionresultsshowedthattheassaywasspecifictoM．synoviaewithadetectionlimitof10copies，whichwashigherthantheroutinePCR，andnocross-reactionswiththeotherpathogenofchicken．Inaddition，the

6、positiveresultwasvisibleinpresenceofCalcein．ThesedatasuggestthatthisLAMPassayisasimpleandspecificmethodforrapiddetectionofM．synoviaeinclinicalsamples．Keywords：Mycoplasmasynoviae；LAMP；detection滑液支原体(Mycoplasmasynoviae，MS)以侵害然快速、敏感性较高，但是需要使用昂贵的仪器和鸡关节滑液、腱鞘膜和气囊为主，引起鸡亚临

7、床型试剂等。环介导等温扩增技术(LAMP)具有简捷、成的上呼吸道感染和关节滑液囊炎。鸡群感染该病可本低廉和结果可视化等优点『5]，目前在一些病原微以导致明显的跛行，生长发育迟缓及胴体降级等⋯。生物的检测中被广泛应用[6-13]。目前，国内外还没有快速检测MS是采取紧急防制措施和净化MS的前应用LAMP检测鸡MS的研究报导。本实验以MS提。目前MS．PCR检测技术已有报道，该方法虽热休克ATP依赖的蛋白酶(HeatshockATP．dependent*Correspondingauthor收稿日期：2013．02—20基金项目

8、：广西特聘专家专项(2011B020)；国家百千万人才工程人选专项(945200603)；广西科技重大专项(1222003-2—4)作者简介：邓显文(1963一)，男，广西贺州人，研究员，主要从事动物分子生物学研究．通信作者：E．mail：xiezhixun@126．corn第1期邓显文，