利用连接介导PCR检测外源基因整合位点体系的建立-论文.pdf

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1、第44卷第12期东北农业大学学报44(12)：93-972013年l2月JournalofNortheastAgriculturalUniversityDecember2013网络出版时间2013-12-2112：21：35[URL】http：／／www．cnki．net／kcms／detail／23．1391．S．20131221．1221．010．html利用连接介导PCR检测外源基因整合位点体系的建立刘娣，李斌，张冬杰(1．黑龙江省农业科学院，哈尔滨150086；2．东北农业大学动物科学技术学院，哈尔滨150030)摘要：黑素皮质

2、素受体4(Melanocortinreceptor4，MC4R)基因是影响猪生长肥育性能的主效基因之一，是参与调控体重、采食和能量平衡的关键信号物质。文章以转猪MC4R基因阳性小鼠基因组为试验材料，通过连接介导PCR(1igation—mediatedPCR，LM—PCR)方法，检测猪MC4R基因在小鼠基因组上的整合位点。结果表明，通过显微注射导入的猪MC4R基因随机整合到了小鼠6号染色体的37236754位点处。本研究初步建立了利用LM—PCR法对外源基因整合位点检测的体系，可为今后转基因动物检测奠定基础。关键词：猪；MC4R基因；转

3、基因小鼠；整合位点；LM—PCR中图分类号：$767．5；X172文献标志码：A文章编号：1005—9369(2013)12—0093—05刘娣，李斌，张冬杰．利用连接介-~PCR检测外源基因整合位点体系的建fr[J1．东北农业大学学报，2013，44(12)：93-97．LiuDi，LiBin，ZhangDongjie．Detectionofintegratedexogenoussequencebyusingtheligation-mediatedPCRmethod[J】JournalofNo~heastAgriculturalUni

4、versity,2013，44(12)：93-97．(inChinesewithEnglishabstract)Detectionofintegratedexogenoussequencebyusingtheligation——mediatedPCRmethod／uuDi¨，LIBin，ZHANGDongjie’(1．HeilongjiangAcademyofAgriculturalSciences，Harbin150086，China；2．SchoolofAnimalSciencesandTechnology,NortheastAgr

5、iculturalUniversity,Harbin150030，China)Abstract：Melanocortinreceptor4(MC4R1geneisoneofthemajorgenesthatafectthegrowing-finishingperformanceinpigsandisthekeysignalsubstancesinvolvedinbodyweightregulation，feedintakeandenergybalance．Thisstudywasdesignedtodetecttheintegrated

6、porcineMC4Rsequenceinthepositivetransgenicmousegenomeusingligation-mediatedPCR(LM-PCR)methodwhichwassavedinourlaboratory．TheresultsshowedthattheporcineMC4Rgenerandomlyintegratedintothemousechromosome637236754site．Thisstudypreliminanlyestablishedtheexogenousgeneintegratio

7、nsitedetectionsystembyusingtheLM—PCRmethodandlaidthefoundationfortransgenicanimals。detectioninthefuture．Keywords：pig；MC,4Rgene；tmnsgenicmice；integrationsite；LM-PCR外源基因整合位点检测，是鉴定转基因动合到宿主基因组发生在DNA复制s期，以多位点物的最基本、最重要步骤。整合位点侧翼序列是和单一位点形式随机插人受体基因组中的任意位外源基因表型研究和功能探讨的前提条件，对目置，存在毒

8、性整合、有效整合和沉默整合三种整的基因正常转录和表达有重要影响n。外源基因整合状态，其表达水平不同口。目前检测外源基因整收稿日期：2013—09—03基金项目：国家生猪产业体系项目(CARS一36)作者简介