杂交转育和累代选育对转基因家蚕外源基因整合位点及拷贝数的影响.pdf

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1、西南农业学报2014年27卷2期SouthwestChinaJournalofAgriculturalSciencesV01．27Nn2文章编号：1001—4829(2014)02—0892—04杂交转育和累代选育对转基因家蚕外源基因整合位点及拷贝数的影响张雨丽，龙定沛2，张桂征，闭立辉h，赵爱春2(1．广西蚕业科学研究院，广西南宁530007；2．西南大学家蚕基因组生物学国家重点实验室，重庆北碚400716)摘要：为了解转基因家蚕在杂交转育和累代选育过程中，外源基因在基因组上的整合位点和拷贝数变化情况，通过反向PeR和southern杂交，测定外源基因在杂交一代和三代品系的拷

2、贝数与插入位点。反向PCR结果显示，所有样品均只扩增出一条片段，且大小一致。对扩增片段进行克隆测序和比对发现，外源基因均系插入同一位点，位于24号染色体。Southernblotting试验结果表明各试验样品均得到了较好的一条杂交信号，而对照没有杂交信号，说明外源基因在各个样品中均系单拷贝插入，而且插入的位置没有随着转育和传代培养而发生变化。研究结果表明外源基因可稳定遗传，将此转基因材料与常规品种材料进行杂交，选育优良家蚕品种的方法是有效可行的。关键词：杂交转育；整合位点；拷贝数；反向PCR；Southern杂交中图分类号：S851．347．31文献标识码：AEfectofTr

3、ansgeneIntegrationSitesandCopyNumbersonHybrizationandBreedinginSilkwormZHANGYu—li。LONGDing—pei，ZHANGGui—zheng，BILi．hui‘，ZHAOAi．ehun’，(1．GuangxiResearchAcademyofSeficulturalScience，GuangxiNanning530007，China；2．StateKeyLaboratoryofSilkwormGenomeBiol·ogy，SouthwestUniversity，Chongqing400716，Chin

4、a)Abstract：Inordertostudythetransformationoftransgeneintegrationsitesandcopynumingenomeafterhybrizationandbreeding．wedeterminedtheexogenousgene’8integrationsitesandcopynumbersingenomeofhybridofspring(F1andF3)byinversePCRandsouth-emblotting．InversePCRresultsshowedthat，allthesampleswereonlyamp

5、lifledonefragmentwiththeBalnesize．Then，weclonedand8e-queneedtheamplifiedfragmentofPeR．Resultofthesequenceanlignmentoftheamplifiedfragment’ssequenceandsilkwormgenomic8e-quencesshowedthat，exogenousgenewereinsertedintothesamesiteandlocatedonchromosome24．Allthetestsamplesgotonevividhy-bridizatio

6、nsignalsbyseuthemblotting，whilethereWaSnohybridizationsignalofcontrol，whichindicatedthattheexogenousgeneinallsamplesweresinshcopyandtransgeneintegrationsitesremainedunchangedduringhybridizationwdbreedingfromgenerationtogenera-tion．TheseresultsindicatedthatexogenousgeneWaSstablyinherited，andt

7、hemethodofusingtransgenicsl~alnsandconventionalstrainshybridizationtoobtainhighqualitysilkwormvarietiesWaSfeaSibleandefective．Keywords：Hybrization；Integrationsites；Copynumber8；InversePeR；Southernblotting2008年西南大学赵爱春等⋯将增强型绿色荧离纯化和综合经济性状的杂交改良J，以期实现转光蛋