基因C型鸭肝病毒单克隆抗体制备及其抗原表位鉴定-论文.pdf

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1、第36卷第4期中国预防兽医学报VO1．36．NO．42014年4月ChineseJournalofPreventiveVeterinaryMedicineApr．2014doi：10．3969~．issn．1008—0589．2014．04．12基因C型鸭甲肝病毒单克隆抗体制备及其抗原表位鉴定程方明，张焕容，洪杰，王远微，r，岳华，一，汤承，(1．西南民族大学生命科学与技术学院，四川成都610041；2．西南民族大学动物医学四川省高等学校重点实验室，四川成都610041)摘要：为制备基因C型鸭甲肝病毒(DHAV．c)单克隆抗体(Mab)，本

2、研究根据DHAVCORF编码氨基酸序列与基因A型DHAV(DHAV．A)相应序列比对结果，利用生物信息学软件筛选位于DHAVCORF编码蛋白序列上的不同抗原表位，合成5条十肽表位序列，分别与KLH载体蛋白偶联后免疫BALB／c小鼠，经细胞融合筛选获得5株稳定分泌抗DHAV．CMAb杂交瘤细胞株。Westernblot显示，5株MAb均能够与DHAV．C发生特异性反应，其中5H24-9、3E18．4和5E3-93株MAb不与DHAV．A、鸭瘟病毒、新城疫病毒和禽流感病毒反应，为DHAV—C的特异性MAb，同时也证明与这3株MAb结合的十肽序列

3、为DHAV．C的抗原表位。这3株MAb亚类分别为IgG2b、IgGl和IgG2b。MAb的制备为建立DHAV．C的检测方法和致病机理奠定了基础。关键词：基因C型鸭甲肝病毒；抗原表位；单克隆抗体；ELISA中图分类号：$852．65文献标识码：A文章编号：1008．0589(2014)04．0301．04MonoclonalantibodypreparationandtheepitopeidentificationofgenotypeCduckhepatitisAvirusCHENGFang—ming，ZHANGHuan—rong'，HONG

4、Jie，WANGYuan—wei，YUEHua’。，TANGCheng，(1．CollegeofLifeScienceandTechnology，SouthwestUniversityforNationalities，Chengdu610041，China；2．KeyLaboratoryofSichuanInstitutesofHigherLearning，SouthwestUniversityforNationalities，Chengdu610041，China)Abstract：Toidentifyantigenepitopesofg

5、enotypeCduckhepatitisAvirus(DHAV—C)andpreparecorrespondingmonoclonalantibodies(MAbs)，thepotentialantigenepitopesofDHAV—Cwerepredictedbybioinformaticsoflwaresaccordingtoitscompletededucedaminoacidsequencesandartificiallysynthetizedasdifferent10-amino-acidpolypeptidestoimmun

6、eBALB／cmiceforpreparationofMAbs．Inaddition，fiveMAbswerepreparedbycellfusiontechnique．WesternblotresultsshowedthatthreeofthefiveMAbsreactedspecificallywithDHAV-C，butnotwithgenotypeAduckhepatitisAvirus(DHAV-A)，duckplaquevirus，Newcasstlediseasevirus(NDV)andavianinfluenzavirus

7、(AIV)．TheMAbsubclassesofthethreespecificMAbswereIgG2b，IgG1andIgG2b，respectively．ThepreparationofMAbsandtheverificationofDHAV-CantigenepitopesprovidedthebasisforthefurtherdevelopmentofdetectionmethodforDHAV—C．Keywords：genotypeCduckhepatitisAvirus(DHAV—C)；antigenepitopes；mon

8、oclonalantibody(MAb)；ELISA*Correspondingauthor收稿日期：2013—05．17基金项目：国家高技术研究发展计~(2012AA10130