三个猪戊型肝炎病毒ORF2基因连续片段核酸疫苗的构建-论文.pdf

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1、中国兽医科学2013，43(10)：1059—1066ChineseVeterinaryScience中图分类号：S852．659．6文献标志码：A文章编号：1673—4696(2013)10—1059—08三个猪戊型肝炎病毒ORF2基因连续片段核酸疫苗的构建李斌，苏乾莲。，赵武，秦毅斌，梁家幸，肖爱1，2，卢冰霞，李莹莹，何颖。，段群棚。，姜佳佳，梁保忠(1．广西兽医研究所，广西南宁530001；2．广西畜禽疫苗新技术重点实验室，广西南宁530001；3．广西大学动物科学技术学院，广西南宁530

2、005)摘要：为了研制猪戊型肝炎(HE)基因工程疫苗，设计引物扩增猪戊型肝炎病毒(HEV)的基因片段LB1、LB2、LB3，分别与真核表达载体pEASY—M1ExpressionVector直接进行T—A连接，构建得到了重组真核表达质粒pEASY—LB1、pEASY-LB2、pEASY—LB3。将这3个重组真核表达质粒分别转染293T细胞，采用实时荧光定量RT—PCR检测目的基因，并进行SDS—PAGE电泳分析和Western—blot鉴定。结果显示，重组真核表达质粒pEASY—LBI、pEASY

3、—LB2、pEASY—LB3在转染的293T细胞中均可表达一约2O．5ku的目的蛋白，且具有良好的HEV抗原性。本试验获得的3个HEV0RF2连续片段的候选核酸疫苗为今后进一步研制HEV核酸疫苗奠定了基础。关键词：猪；戊型肝炎病毒；ORF2；真核表达质粒；核酸疫苗ConstructionofthreenucleicacidvaccinesofswinehepatitisEvirusORF2genecontinuousfragmentsLIBin一，SUQian—lian，ZHAOWu，QINYi—

4、bin，LIANGJia—xing”，XIAOAi—huan。，LUBing—xia。，LIYing—ying。，HEYing，DUANQun—peng，JIANGJia—jia。，LIANGBao—zhong’。(1．GuangxiVeterinaryResearchInstitute，Nanning530001，China；2．GuangxiKeyLaboratoryofAnimalVaccinesandNewTechnology，Nanning530001，China；3．Collegeof

5、AnimalScienceandTechnology，GuangxiUniversity，Nanning530005，China)Abstract：InordertodevelopswinehepatitisE(HE)geneticallyengineeringvaccines，specificprimersofgenesLB1，LB2，LB3ofswinehepatitisEvirusweredesignedandusedforamplification，DNAampliconsgenerate

6、dbyPCRassays，weredirectlyclonedintoT—AplasmidandexpressedusingpEASY—M1expres—sionvector．ThreerecombinanteukaryoticexpressionplasmidsofpEASY—LB1，pEASY—LB2andpEASY—LB3wereconstructed．TheeukaryoticexpressionplasmidsofpEASY—LB1，pEASY—LB2，pEASY—LB3weretran

7、sfectedinto293Tcells，andthreetargetgenesweredetectedbyreal—timefluorescentquantitativeRT—PCR．TheresuItsconfirmedthatthreeeukaryoticexpressionplasmidsweretransfectedinto293Tcellsandtargetproteinwereexpressed．AnalysisbySDS-PAGEelectrophoresisandWestern—

8、blotanalysisindicatedthatthreetargetproteinswereexpressed293TcellstransfectedbyeukaryoticexpressionplasmidsOf收稿日期：2013—06—14；修回日期：2013—09—22基金项目：广西基本科研业务费专项(桂科专项10—1；桂科专项11—1)；广西科技攻关项目(桂科攻10100014—4)；广西水产畜牧兽医局科技计划项目(桂渔牧科1204931)；广西畜禽疫苗新技术重点实验室