抗Ⅱ型登革病毒蛋白抗体的制备和特点分析.pdf

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1、微生物与感染JournalofMicrobesandInfections,June25,2015,10(3)．147-153http：fjmi,fudan,edu．cn·147·——·论著·抗Ⅱ型登革病毒蛋白抗体的制备和特点分析魏建春，崔晓云，吴娜，安静首都医科大学基础医学院病原生物学系微生物学教研室，北京100069摘要：本研究旨在制备和鉴定小鼠抗Ⅱ型登革病毒(DENV一2)10种蛋白的抗体，为后续相关研究提供实验材料。利用真核表达载体pReceiver构建DENV一210种蛋白的重组质粒，提取质粒DNA，肌内注射免疫小鼠，共免疫4

2、次。末次免疫后2周取小鼠血清，利用DENV一2感染的Vero细胞和DENV一2各蛋白的稳定表达细胞，通过酶联免疫吸附试验(ELISA)、间接免疫荧光法(IFA)和蛋白免疫印迹法评价免疫效果，分析抗体的特点。DNA免疫小鼠后获得抗DENV-210种蛋白的抗血清，抗体效价波动于1：400~1：16127之间，以抗E蛋白抗体效价最高，达1：16127，而抗NS3、NS4b、NS5蛋白抗体效价较低，仅为1：400。利用DENV-2感染的Vero细胞和稳定表达病毒蛋白的EAhy926细胞进行IFA染色，抗DENV-2各蛋白的抗血清均可特异性识别

3、DENV．2抗原。蛋白免疫印迹结果显示，抗E、NS1、NS4b和NS5蛋白抗体能识别热变性蛋白，其他抗血清未呈现阳性反应条带。本研究提示，DNA免疫小鼠所获得的抗DENV-2各蛋白抗体能特异性识别自然感染或模拟自然感染状态下的DENV-2蛋白，可为后续相关研究提供工具，也表明DNA免疫法可作为抗体制备的一种策略。关键词：登革病毒；结构蛋白；非结构蛋白；抗体；EAhy926细胞Preparationandcharacteristicanalysisofanti—denguevirusserotype2antibodiesWEIJian-

4、Chun，CUIXiao-Yun，WUNa，ANJingDepartmentofMicrobiology，SchoolofBasicMedicalSciences，CapitaIMedicalUniversity，Beijing100069，ChinaAbstract．Eukaryoticexpressionvectorcontainingdifferentproteins(C，M，EandNS1—5)ofdenguevirusserotype2(DENV．2)wereconstructedandintramuscularlyinje

5、cteddirectlytomicefordevelopingantibodiesagainstDENV一2．Twoweeksafterthefourthimmunization。serawerecollectedandtheimmuneeffectswereevaluatedbyenzyme．1inkedimmunosorbentassay(ELISA)，indirectimmunofluorescenceassay(IFA)andWesternblotting．Specificantibodiescouldbeobtainedby

6、DNAimmunization，andthetitersoftheseantibodiesfluctuatedbetween1：400．1：16127．Ofthose．theantibodyagainstproteinEshowedthehighesttiterat1：16127whereastheantibodiesagainstproteinsNS3，NS4bandNS5hadthelowesttiterat1：400．TheresultsshowedthatallantibodiesacquiredbvDNAimmunizati

7、oncouldproducespecificimmunofluorescentreactionswhentestedusingDENV一2-infectedVerocells．suggestingthatantibodiespreparedbyDNAimmunizationcouldspecificallyidentifynaturallyinfectedDENV一2．AntibodiesagainstproteinsE，NS1，NS4bandNS5couldalsoidentifyheat．denaturedproteins．The

8、resultsgeneratedfromthisstudyprovidedthebaseforfurtherresearch．基金项目：国家自然科学基金(81301435、81401676、81471957)通信作者：安