急性髓系白血病NPM1和FLT3基因突变与临床特点的关系.pdf

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1、第31卷第3期山西大同大学学报(自然科学版)V01．31．No．32015年6月JournalofShanxiDatongUniversity(NaturalScience)Jun2015文章编号：1674-0874(2015)03-0043-04急性髓系白血病NPM1和FLT3基因突变与临床特点的关系吴凌颖，马建华，范进婷，赵芳，冯雅青(大同市第三人民医院变态反应科，山西大同037008)摘要：目的研究伴有NPM1和FLT3一ITD突变基因急性髓系白血病患者的临床特点。方法对67例初诊AML患者进行NPM1基因突变和FLT3一ITD基因突变检测，比较其结果。结果NPM1突

2、变阳性患者占所有AML惠者的10．4％，占核型正常AML患者的26．1％；FLT3一ITD基因突变阳性占所有AML患者的10．4％，占核型正常AML患者的17．4％。NPM1突变阳性患者和NPM1突变阴性患者相比，初诊时血小板、AML—M比例、CD34阳性患者比例、染色体核型正常比例、伴有特殊融合基因患者的比例、伴有FLT3一ITD突变阳性患者的比例等指标差异均有统计学意义。而FLT3一ITD基因突变阳性患者就诊时白细胞数和骨髓原始细胞比例明显高于阴性患者。结论对初诊时核型正常AML患者检测NPM1和FLT3一ITD基因突变，有利于预后评估和指导治疗。关键词：白血病；非淋巴

3、细胞；急性；基因，NPM1，FLT3一ITD；DNA突变分析中图分类号：R557文献标识码：A核仁磷酸蛋白(NPM1)基因突变是急性髓系白变。AML—M3采用全反式维甲酸联合亚砷酸的诱血病(AML)最常见的基因突变，发生率为25％～导方案，其他类型AML的诱导化疗方案应用阿糖35％，在正常核型AML患者中突变率更高，正常核胞苷联合蒽环类药物为主的方案，如DA，MA，IA，型伴NPM1突变的AML患者已被NCCN指南列为预HMA，CAG等。后良好组。FMS样酪氨酸激酶3(FLT3)基因内部串1_2染色体核型分析联重复(I，I’D)是近年在急性髓系白血病(AML)患者中骨髓细胞

4、经过24～48h培养后，收集细胞常发现的常见突变类型，在AML中的发生率为规制片，G显带，根据《人类细胞遗传学国际命名体15％一35％，大量研究显示，FLT3突变与外周血高制(ISCN，1995))进行核型分析。白细胞、骨髓高白血病细胞比例有关，是AML的重1．3四色流式细胞术检测免疫表型要预后影响因素。当AML患者同时出现以上2种仪器采用美国BD公司FACSCalibur型流式细突变时，文献报道预后较差。我们对67例AML患胞仪，单克隆抗体和配套试剂为美国BD公司试剂，者进行资料分析，了解其临床特点，印证其与疗效分析采用CellQuestPro软件。根据初治时白血病特的关

5、系。异免疫表型进行随后的跟踪随访。1．4PCR-毛细管电泳法检测NPM1和FLT3一ITD1病例与方法取患者的骨髓单个核细胞标本，采用DNA提取1．1病例来源试剂盒(美国，AXYGENBIOSCIENCES公司产品)，201105—201405期间大同市第三人民医院共按说明书提取基因组DNA，分光光度仪检测产物浓收治67例AML患者，所有患者均进行骨髓形态学度和纯度，并用去离子水稀释样品至50ng／备检查，并进行免疫分型、细胞遗传学和分子生物学用。NPM1基因的扩增引物参照文献[21设计合成。检查。所有患者诊断均符合急性髓系白血病诊断NPM1基因第12外显子引物：上游引物5

6、一TG．标准】。其中男31例，女36例，中位年龄47f4～GrITCCrrAACCACArITC，I’IT一3；下游引物5一79)岁。FAB分型M1例，M16例，M，l6例，M10CAAGACTArIfITI’GCCATrC—CTAAC一3，上游引物5例，M18例，M3例，M2例，MDS／AML1例。分子标记FAM(6一羧基荧光素)，产物长度为478bp。同生物学检测包括融合基因如AML1一ETO，PML—时参照文献[31设计FLT3引物：上游引物5一RARot，CBFB—MYHll，NPMl和FLT3一ITD基因突GCAATITAGGTATGAAAGCCAGC一3；下游引

7、物收稿日期：2015—03—12作者简介：吴凌颖(1967-)，女，山西大同人，硕士，副主任医师，研究方向：血液病。山西大同大学学报(自然科学版)5一C1-ITI’CAGCA1_IWGACGGCAACC一3，上游引物FLT3一ITD和NPMI同时突变阳性患者2例，均染色5标记TAMRA(6一羧基四甲基若丹明)荧光素，扩增体核型正常。3例FLT3一ITD基因突变阳性异常核产物长度329bp。采用多重PCR的方法在20L型分别为t(15；17)(q22；q21)、inv(16)(p13；q22)和反应体系中同时扩增NP