苜蓿愈伤组织细胞学观察及芽分化的研究.pdf

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1、江苏农业科学2015年第43卷第6期-——49-——李红，李波，陈雪梅，等．苜蓿愈伤组织细胞学观察及芽分化的研究[J]．江苏农业科学，2015，43(6)：49—51doi：10．15889／j．issn．1002—1302．2015．06．013苜蓿愈伤组织细胞学观察及芽分化的研究李红，李波，陈雪梅，徐婉玉，王烨(1．黑龙江省畜牧研究所，黑龙江齐齐哈尔161000；2．齐齐哈尔大学生命科学与农林学院，黑龙江齐齐哈尔161006)摘要：以龙牧801苜蓿叶片诱导产生的愈伤组织为材料，将其接种在诱导和胚性发生培养基上，采用形态学、涂片法和石蜡切片法对愈伤组织的形态和内部细胞结构进行观察。此外，研

2、究了NAA和KT对愈伤组织芽分化的影响。结果表明：胚性愈伤组织和非胚性愈伤组织在形态和细胞学特性方面均存在明显差异，苜蓿愈伤组织芽分化最佳激素配比为0．5mg／LNAA+1．5mg／LKT，研究结果将为苜蓿组培快繁奠定理论基础。关键词：苜蓿；愈伤组织；解剖结构；芽分化中图分类号：s541．104文献标志码：A文章编号：1002—1302(2015)06—0049—02紫花苜蓿(MedicagosativaL．)为豆科草本植物，是世界固绿双重染色。上种植最广泛的牧草之一，再生性和适应性较强⋯。利用植1．2．3愈伤组织芽分化激素配比的筛选选用MS培养基物组织培养技术产生愈伤组织可以进行苜蓿的抗逆

3、性育种，为基础培养基，添加NAA和KT，NAA浓度分别为0．1、0．3、但是已有研究表明苜蓿愈伤组织的再分化率较低，易产生玻0．5mg／L，KT浓度分别为0．5、1．0、1．5ms／L，2种激素进行璃化现象，其中激素是影响苜蓿愈伤组织形成及分化的主要正交组合，共9种配方组合。将新鲜的愈伤组织分割成约因素。因此，本试验通过对愈伤组织显微结构进行观察并5mm的小块，接种到9种不同培养基中，每瓶6—9块。培研究激素对愈伤组织分化的影响，旨在为苜蓿组培快繁提供养条件同上，培养15d后对1～9号各培养基的材料进行观参考依据。察和统计。1材料与方法2结果与分析1．1试验材料2．1胚性与非胚性愈伤组织形态

4、上的差异以龙牧801苜蓿叶片诱导出的愈伤组织为材料。愈伤组胚性愈伤是指具有胚胎发生能力的愈伤组织，它处于增织诱导和继代培养基为MS+1mg／L2，4一D+0．5mg／L值旺盛和分化状态。非胚性愈伤是指愈伤组织中的细胞虽具6一BA+8．5g／L琼脂+3Og／L蔗糖，每20d继代1次。胚性有增殖能力，但没有胚胎发生能力的愈伤】。这2种愈伤组愈伤组织诱导培养基为MS+0．2mg／LNAA+0．1mg／L织在形态学和细胞学上有明显的差异。培养8d的2种类型6一BA+0．1mg／LKT+8．5g／L琼脂+30g／L蔗糖。挑取愈伤组织在形态上有明显的差异，其中胚性愈伤组织为淡绿新鲜的苜蓿愈伤组织，将其切

5、成5nlIl3大小，接种于胚性愈伤色、质地致密、表面较粗糙且有颗粒状突起；而非胚性愈伤组组织诱导和芽分化培养基，在23—25℃和1000—3000lx的织表明光滑、呈淡黄色、质地疏松(表l、图1)。光照培养箱下培养。表1胚性与非胚性愈伤组织的形态比较1．2试验方法1．2．1愈伤组织形态观察对继代培养8d的愈伤组织进行细胞表面结构、颜色和质地的观察。1．2．2愈伤组织涂片和石蜡切片制作取新鲜的、长势良好的愈伤组织小块，放在培养瓶中，滴3～5滴卡宝品红染液，用2．2解剖结构的观察注射器胶皮头将愈伤组织充分捣碎，吸取上层清液，滴1滴于通过对愈伤组织显微结构观察(图2)发现，胚性细胞与干净的载玻片上

6、，显微镜下观察并拍照。此外，选取新鲜的、非胚性细胞差异显著。胚性愈伤组织细胞较小，细胞直径约长势较好的愈伤组织材料，进行常规石蜡切片制作，用番红和10，胞质浓厚、染色深、细胞核大、细胞形状较规则，是排列紧密的近圆形细胞，具有分生组织细胞的特点。因此，胚性愈伤组织细胞分裂能力强，代谢活跃，具有体细胞胚发生能收稿日期：2014—07一O1基金项目：国家科技支撑计划(编号：2011BAD17B01—04)；黑龙江省力。非胚性愈伤组织细胞大，直径约20m，胞质稀薄、染色教育厅科学技术研究项目(编号：12521610)。浅、细胞核小、形状不规则、排列疏松，细胞表面褶皱，分裂能作者简介：李红(1960一

7、)，女，山东莱芜人，研究员，主要从事牧草力弱，无体细胞胚发生能力。初始愈伤组织细胞的形态结构与饲料作物育种与栽培研究工作。E—mail：hljlihong@163．tom。位于上述两者之间，也无体细胞胚发生能力。通信作者：李波，教授，主要从事细胞生物学的教学和科研工作。2．3芽分化的最佳激素配比E—mail：libo1962@163．corn。本试验在MS培养基上附加不同浓度的NAA，并分别与江苏农业科学20