噬血细胞综合征患儿外周血辅助T细胞17与调节性T细胞的变化.pdf

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1、广东医学2014年7月第35卷第14期GuangdongMedicalJournalJu1．2014，Vo1．35，No．14·2l99·噬血细胞综合征患JL#b周血辅助T细胞17与调节性T细胞的变化水彭艳辉，殷小成南华大学附属第一医院儿科(湖南衡阳421001)【摘要】目的探讨外周血调节性T细胞与辅助T细胞17(Th17)在噬血细胞综合征(HPS)患儿中的动态演变。方法选择32例HPS患儿为HPS组及30例健康儿童为健康对照组。采用实时荧光RT—PCR和流式细胞术分别从mRNA与蛋白水平检测外周

2、血CD4T细胞IL一17和Foxp3的表达。结果HPS组外周血CD4T细胞IL一17蛋白及mRNA表达水平显著高于健康对照组(P<0．05，P<0．01)；HPS组外周血CD4T细胞Foxp3蛋白及mRNA表达水平显著低于健康对照组(P<0．05，P<0．01)。结论Thl7及调节性T细胞的失衡与HPS的发生发展密切相关。【关键词】噬血细胞综合征；T淋巴细胞；辅助诱导；儿童噬血细胞综合征(HPS)是一组以淋巴细胞、单核院伦理委员会批准且符合医学伦理学标准。细胞和巨噬细胞增生和活化且伴有活跃的自噬血

3、细胞1．2方法现象为特征的系统反应性增生疾病故又称噬血细胞性1．2．1外周血CD4T细胞IL一17及Foxp3蛋白质表淋巴组织细胞增多症，该病在儿童中发病主要是由于达的检测(1)将PMBC加入1mLRPMI1640培养液感染诱发。因其病因复杂多样化，多个靶器官受累，病中，在培养液中加入50rig／mLPMA，1g／mL离子霉情进展迅速、凶险，病死率高。研究表明：辅助T细素和20pg／mL布霉菲德菌素A培养箱中培养5h；1胞与调节性T细胞(Treg)可能参与了HPS的发生、发mLPBS洗涤1次，1％

4、的BSA封闭15rain；加通透液A展。辅助T细胞17(Thl7)是最新发现的CD4T15rain，1mLPBS洗涤1次；加通透液B和10LIL一细胞亚群，可分泌白细胞介素一17A及白细胞介素一17一藻红蛋白和同性对照IgG1一藻红蛋白室温2017F等细胞因子的效应性T细胞，CD4IL一17的Train；1mLPBS洗涤2次，500LPBS重悬细胞，以流细胞可作为IL一17细胞的生物指标-53。Foxp3式细胞仪(美国BD公司)进行检测。(2)PMBC常温避(Forkheadboxp3，Foxp3

5、)又称叉状头／翅膀状螺旋核转光加入1mL新鲜配制的固定／透膜剂。4℃避光反应录因子，是Treg最特异性分子标记，CD4Foxp3的T1h后以透膜缓冲液洗涤并重悬，将此细胞液分为2管，细胞可作为Treg的生物指标。最新研究表明IL一分别加入10Foxp3一藻红蛋白和同性对照IgG1一藻17／Treg细胞的稳态在维持正常免疫应答和防止自身红蛋白，室温避光反应20rain后洗涤3次，以500免疫性疾病中发挥关键性的作用，但该稳态与HPS发1％多聚甲醛PBS重悬细胞，进行FCM测定。具体操作生发展的关系尚

6、不明确。本研究采用实时荧光RT—按试剂盒说明书步骤进行。PCR和流式细胞术(FCM)的方法，分别从mRNA与蛋1．2．2外周血CD4T细胞IL一17及Foxp3mRNA表白的水平检测HPS患者外周血CD4T细胞IL一17及达的检测自外周血淋巴细胞分离液筛选外周血单个Foxp3的表达，以探讨Thl7与Treg在HPS发生及发展核细胞，然后用CD4T细胞免疫磁珠分选出CD4T细中的作用。胞，调整其浓度约为5x10·mL的悬液备用；Tfizol1资料与方法一步法提取总RNA，按照试剂盒说明书步骤反转录e

7、DNA及行RT—PCR检测Foxp3mRNA、Thl7mRNA1．1一般资料选择2013年6—12月南华大学附属第水平表达。各基因引物序列及扩增产物长度见表1。采一医院儿科病房收治的32例HPS患儿为HPS组，其中用标准曲线法计算mRNA表达量，并计算其相对表达量男20例，女12例，年龄3个月至10岁，平均(7．72±(B—aetin校正值)。引物均由上海生工生物工程技术2．44)岁；病理诊断均依照中华医学会的规范与指服务有限公司合成。南。。。排除：心肝肺肾功能疾病；恶性肿瘤；先天免疫1．3统计学

8、方法使用SPSS18．0统计软件，计量资性疾病及代谢性疾病。本院同期门诊体检健康儿童料两组比较采用t检验，多组间比较采用单因素方差30例为健康对照组，男16例，女14例，年龄5个月至分析，计数资料采用)C检验。1l岁，平均(7．40±2．15)岁。以上两组年龄及性别差2结果异无统计学意义(P>0．05)，有可比性。本研究经医2．1两组外周血CD4T细胞IL一17及Foxp3蛋白质国家自然科学基金资助项目(编号：31271482)的表达HPS组外周血CD4T细胞中IL一17细胞比．2