胶体金标记技术检测麻疹抗体方法的建立.pdf

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1、医学动物防制2013年4月第29卷第4期JMedPestControl，Apr2013，Vo1．29，No．4·469·doi：10．7629／yxdwfz201304048·检验技术·胶体金标记技术检测麻疹抗体方法的建立刘维华，张双宅，徐保红，赵冬，张弘摘要：目的利用原核基因表达的麻疹H蛋白，结合胶体金微粒，制备检测麻疹IgG抗体的胶体金层析试纸条。方法利用抗IgG抗体结合IgG抗体一麻疹H蛋白一金微粒的原理，优化条件，确定最佳标记蛋白pH值及蛋白量等，制备胶体金试纸条，并进行样本检测。结果根据自身表达蛋白的特点及浓度，标记的金微

2、粒pH值为9．0，蛋白量为241xg／ml。79份样品中，阳性符合率为94．2％，阳性检出率组间比较差异无统计学意义。结论该试纸条测定麻疹IgG抗体表现了良好的符合率，可以考虑用于条件比较差的县区麻疹IgG的监测，简便快速，有良好的经济效益。关键词：麻疹；H蛋白；胶体金技术；基因克隆表达中图分类号：R466．6；R511．1文献标识码：A文章编号：1003—6245(2013)04—0469—03Developmentofmethodtodetectmeaslesantibodywithcolloidalgoldlabelingte

3、chniqueLIUWei—hua，ZHANGShuang—zhai，XUBao—hong，ZHAODong，ZHANGHong．ShifiazhuangCenterforDiseaseControlandPrevention，Shijiazhuang050011，Hebei，China．Abstract：ObjectiveTodevelopcolloidalgoldchromatographydipsticksofIgGantibodytodetectmeaslesusingprokaryoticgeneexpressionofm

4、easlesHprotein，whichwascombinedwithcolloidalgoldparticles．MethodTakeadvantageofcombinedwithIgGantibodyIgGantibody—-measlesHprotein--theprincipleofgoldpar--ticles，determinetheoptimalmarkerproteinpHandtheamountofproteinanddothesampletest．ResultsAccordingtocharacteristics

5、ofproteinexpressionandconcentration，pHofcolloidalgoldparticleswas9．0andconcentrationofproteinwas24g／m1．Among79samples，thepositivecoincidenceratewas94．2％．Therewasnostatisticallysignificantdifferenceamongpositivedetectionrategroups．ConclusionsItwasconfirmedthatthediagnos

6、ismethodwasconvenient，rapidandaccurate，whichwaspotentiallylesscostlyforuseinthefieldformeaslesIgGsurveillancewithoutanyotherinstruments．Keywords：Measles；Hprotein；Colloidalgoldtechnology；Genecloneandexpression麻疹是由麻疹病毒(measlesvirus)引起的急性全麻疹监测提供快速、简便、更经济的方法。身发疹性呼吸道传染病，传染性

7、很强。该病毒感染除1材料与方法了能够引起发热、呼吸道卡他症状和全身斑丘疹等急性感染症状外，还能抑制细胞介导的免疫作用，从而1．1材料氯金酸、柠檬酸三钠为国产分析纯；导致肺炎、腹泻等继发感染，少数病例中甚至还能引BSA为日本进口分装；麻疹血凝素蛋白由本研究室制起脑炎及持续性中枢神经系统感染等严重并发症¨J。备；羊抗鼠二抗和羊抗人IgG抗体为Sigma公司产我国的免疫规划要求每年对健康人群进行麻疹IgG抗品；硝酸纤维素膜、玻璃纤维、吸水纸、双面胶等均体的监测，目前所采用的是ELISA方法，由于该方法购自上海金标生物科技公司；需要必要的仪

8、器设备和试剂，费时费力，由于基层疾1．2方法病预防与控制中心不具备工作条件和技术力量，很难1．2．1纯化胶体金制备按柠檬酸还原法制备胶体开展工作，多是将样品送至市级疾控中心进行监测。金溶液。在99ml高纯水中，准确加入lml的1％氯金