植物酶活性实验方案.doc

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1、植物酶活性测定方案植物酶测定的项目有：植物羟化酶（RUBP）、植物多酚氧化酶（PPO）、植物乳酸脱氢酶（LDH）、植物厌氧多肽（ANPs）、植物厌氧代谢蛋白（ANP）、植物过氧化氢酶（CAT）、植物过氧化物酶（POD）、植物超氧化物歧化酶（SOD）、植物以纯脱氢酶（ADH）、植物脱落酸（ABA）、植物ATP酶。一、实验前准备工作：1、实验开始前一天把离心管、枪头灭菌（灭菌锅温度122-123℃时间为20分钟）。2、冷冻研钵和研锤（至少冷冻一天）。3、由于样品较多把离心管编号以防混淆。4、配制PBS缓冲液：母液的配制：0.2M Na2HPO

2、4：称取71.6g Na2HPO4-12H2O，溶于 1000ml水中0.2M NaH2PO4：称取31.2g NaH2PO4-2H2O，溶于1000ml 水中。各种浓度PB(pH=7.4)的配制：先配0.2M PB (pH=7.4，100ml)：取19ml 0.2mol/L的NaH2PO4，81ml 0.2mol/L 的Na2HPO4, 即可。然后只需将0.2M PB (pH=7.4)按相应比例适当稀释即可，0.1M PB（PH=7.4）：取500ml 0.2M PB，加水稀释至1000ml 即可。二实验步骤：1、植物组织匀浆的制备：将

3、植物组织与PBS缓冲液制成1:9（植物组织用克、匀浆用毫升计算）制成10％匀浆，12000转离心十分钟。取上清液放入冰箱2℃保存（最多保存48小时，不然多试验有影响）。注：研磨时可加少许石英砂。2、剩下实验按照试剂盒里的实验说明书进行操作：酶标包被板的第一横排为十个标准孔和一个空白孔，从第二排开始为待测样品孔（每个样品至少有三个重复）。3、由于各个项目测定中都有温育、显色等步骤需要等很长时间，所以最好两三个项目同时进行比较快。4、植物羟化酶（RUBP）、植物脱落酸（ABA）需要把离心好的10％植物匀浆再用PBS缓冲液稀释10倍。植物超氧化

4、物歧化酶（SOD）需要稀释30倍然后按照试剂盒中说明书进行测定。注：以上准备工作所有测定项目通用。