耐甲氧西林金黄色葡萄球菌同源性研究和耐药性探究

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1、耐甲氧西林金黄色葡萄球菌同源性研究和耐药性探究　　[摘要]目的对临床分离的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）进行耐药情况和分子流行病学监测，探讨院内MRSA的流行趋势。方法收集我院2009年1月～2011年6月临床标本分离的MRSA菌株60株；采用MicroscanWalkAway40进行菌株鉴定，同时对所有金黄色葡萄球菌进行药物敏感性分析；采用脉冲场凝胶电泳技术对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌进行分子分型。结果共收集60株MRSA菌株，其中17株被认为是可疑社区获得（CA-MRSA），43株被认为是医院获得（HA-MRSA）。所有菌株均对万

2、古霉素、替考拉宁、利奈唑胺、呋喃妥因和奎奴普丁/达福普汀敏感，未出现耐药菌株。CA-MRSA与HA-MRSA对左旋氧氟沙星和利福平的敏感性有明显差异。临床分离的MRSA菌株PFGE分型较为分散，共分为13种型别，每种型别的菌株数分别为2～6株不等，未出现大范围的院内流行克隆。结论本院收集的临床分离的MRSA菌株多重耐药性严重，其中CA-MRSA相对HA-MRSA敏感性稍高。所有金黄色葡萄球菌未出现糖肽类抗菌药物耐药。MRSA菌株未出现大范围的院内流行株，但仍应加强院内感染流行控制。[关键词]10耐甲氧西林金黄色葡萄球菌；社区获得性；医院获

3、得性；药物敏感性；脉冲场凝胶电泳[中图分类号]R378.1+1[文献标识码]B[文章编号]1673-9701（2014）07-0084-04自20世纪60年代英国检出世界上首例耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA），随后各国MRSA发生率逐渐上升，至80年代后期MRSA已成为医院院内感染的重要病原菌，占医院分离的金黄色葡萄球菌的80%以上[1，2]。MRSA常对多种抗菌药物呈现耐药，并可通过接触途径进行传播，从而引起传播流行，故世界各国均将MRSA的流行情况作为长期监测的重点[3，4]。我院于2009年底开始出现MRSA克隆株的流行，为了解

4、MRSA分子流行克隆的耐药性，探讨本院耐甲氧西林金黄色葡萄球菌主要流行株及其分布特点，本研究对临床非重复分离的60株MRSA进行分子分型，为院内感染的防控提供理论依据。1材料与方法1.1菌株来源2009年1月～2011年6月自衢州市人民医院分离的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌60株，剔除重复菌株。所有菌株用滤纸片法-70℃保存。1.2试剂与仪器西门子德灵公司MicroScan10WalkAway-40全自动微生物鉴定仪进行鉴定，药敏纸片选用英国OXOID公司产品，限制性内切酶ApaⅠ购自TaKaRa宝生物工程大连有限公司，溶葡萄球菌素、高密度琼

5、脂糖和低熔点琼脂糖、溶菌酶、蛋白酶K购自生工生物（上海）公司，Marker沙门菌Braendebrup血清型H9812由杭州邵逸夫医院俞云松教授惠赠。CHEP-MAPPER脉冲电泳仪、UniversalHoodⅡ型凝胶成像仪均为BIO-RAD公司产品，DK-8D型电热恒温水槽购自上海精宏公司，Rotamax420摇床为Thermo公司产品。1.3分离鉴定及药敏试验将从临床采集的合格标本中分离的可疑菌落行革兰染色、触酶试验、血浆凝固酶试验，并用WalkAway-40全自动细菌鉴定仪鉴定并检测各菌株对常用抗菌药物的敏感性，同时用头孢西丁纸片扩

6、散法及苯唑西林MIC法筛选MRSA菌株。严格按照标准操作程序进行。判断标准参照CLSI2010年版；质控菌株为金黄色葡萄球菌ATCC25923和ATCC29213。1.4CA-MRSA的筛选参照Fridkin等[5]建议依据临床资料筛选CA-MRSA，即从门诊或入院48h内分离收集的MRSA，且该患者近期无长期住院病史。符合上述条件的将被可疑为CA-MRSA临床株。1.5MRSA临床菌株的PFGE参照文献[6]，细菌的包埋；细胞壁的裂解；蛋白酶K消化；内切酶对细菌DNA的消化；加样及电泳；凝胶成像仪下观察结果，拍照。101.6PFGE条带

7、的解释通过目测判定其带型之间的关系，采用Tenover等[7]提出的标准进行分型。酶切图谱间有同样的条带数，且相应条带大小相同，可认为是同一型别；由于突变、插入、缺失或倒置的遗传改变导致1～3条条带有差异，可认为是紧密相关，定为亚型；带型中4～6条条带有差异为可能相关，可认为是不同型别；7个或更多个条带有差异，可认为在流行病学上无相关性。1.7统计学方法对CA-MRSA组与HA-MRSA组对抗菌药物的敏感性进行统计学分析，采用χ2检验，P　　从成功分型的48株MRSA菌株型别来看，这批菌株的同源分型较为分散，没有典型的院内流行克隆株，相对

8、较多的A型、E型、G型菌株数也只有6株，其他分型的菌株数均不超过6株。HA-MRSA菌株在每种型中均有出现，其中B型和G型的HA-MRSA菌株较多。CA-MRSA分布在7种型当中，其中A型出现