高中生物 实验10 泡菜的腌制和亚硝酸的测定教案 浙科版选修1.doc

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1、泡菜的腌制和亚硝酸盐的测定一、实验原理亚硝酸盐可以与对氨基苯磺酸发生重氮化反应，这一产物再与N-1-萘基乙二胺偶联，形成紫红色产物，可用光电比色法定量。二、实验目的1、进行泡菜的腌制；2、进行亚硝酸盐的测定。三、实验用具及材料泡菜罐、蔬菜、三角瓶、量筒、烧杯、试管及试管架、pH试纸、容量瓶、研磨过滤器或研钵、微量可调移液器、分光光度计、亚硝酸盐含量的测定试剂盒。三、试剂配制硫酸锌溶液：称取18gZnSO4·7H2O固体加水溶解，稀释至150mL。混匀后备用。氢氧化钠溶液：称取20gNaOH固体，加水至25

2、0mL，备用。N－1－萘基乙二胺盐酸盐溶液：向含有0.08gN－1－萘基乙二胺盐酸盐固体的离心管中加入1mL60%乙酸充分溶解，然后将以上溶解液加入到79mL60%乙酸中再溶解，混匀后，在冰箱中4℃避光保存，1周内稳定。对氨基苯磺酸溶液：称取0.8g对氨基苯磺酸固体溶于56mL蒸馏水和24mL冰乙酸中，棕色瓶室温保存，使用时取上清液。显色液：将N－1－萘基乙二胺盐酸盐溶液与对氨基苯磺酸溶液(上清液)等体积混合。亚硝酸钠标准储液：向含有0.025g亚硝酸钠固体的离心管中加入1mL蒸馏水充分溶解，然后将以上溶

3、解液转移到100mL烧杯中，向烧杯内加入19mL蒸馏水和10mLNH4Cl缓冲液混合，再移至50mL容量瓶中，加蒸馏水定容至50mL，冰箱中避光保存。亚硝酸钠标准溶液(测定时用)：取1mL亚硝酸钠储液，移至100mL容量瓶中，加蒸馏定容，即制得5μg/mL亚硝酸钠标准液。四、实验步骤1、泡菜腌制（1）各种菜（萝卜、白菜等）洗净并切成3～4cm长的小块。（2）按照清水与盐的质量比4:1的比例配制盐水，将盐水煮沸冷却。（3）将经过预处理的新鲜蔬菜混合均匀，装入泡菜坛内，加入盐水没过全部菜料，盖好坛盖。（4）将

4、坛口用水封好，防止外界空气进入。（5）泡菜发酵。2、亚硝酸盐的定量测定（1）样品处理：腌制的泡菜5g及少量泡菜汤，加入研磨过滤器中，将研磨液转移至100mL烧杯中，接着用20mL水洗涤研磨过滤器，合并滤液，用氢氧化钠溶液将pH调至8.0，再加入5mL硫酸锌溶液，混匀，如不产生白色沉淀，再加入氢氧化钠溶液至产生白色沉淀为止。在水浴中加热至60℃，10min后，冷却至室温，用滤纸过滤，用少量水淋洗沉淀2－3次，将滤液和洗涤液在100mL容量瓶中定容。（2）测定：取2mL样品溶液，置于有刻线试管中，加入900μ

5、LNH4Cl缓冲液，500μL60%乙酸和1mL显色液，加水定容至5mL，混合混匀，暗处静止25min；用光程1cm的比色杯在550nm处测定光密度值。以2mL水为空白对照。（3）标准曲线：吸取0，100，200，600，1000μL的亚硝酸钠标准溶液，分别置于有刻线试管中，各加入900μLNH4Cl缓冲液，500μL60%乙酸和1mL显色液，加水定容至5mL，混合混匀，暗处静止25min；用光程1cm的比色杯在550nm处分别测定吸光度值。以亚硝酸钠质量为横坐标，以吸光度值为纵坐标，绘标准曲线。（4）计

6、算：X1=（m2×1000×V1）/（m1×V2×1000）式中：X1为样品中亚硝酸钠含量，单位mg/Kg；m1为样品质量，单位g；m2为通过标准曲线得到的亚硝酸钠的质量，单位μg；V1为样品处理液总体积；V2为测定用样品液体积。若按照以上实验步骤，则m1=5、V1=100、V2=2。五、实验结果与分析1、标准显色液不同浓度亚硝酸钠溶液与显色液反应后的颜色梯度见下图：