血液一般检验-红细胞检验课件.ppt

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1、第二章血液一般检验血常规检验报告单第三节红细胞检验一、红细胞计数二、血红蛋白测定三、血细胞比容测定四、红细胞平均指数五、网织红细胞计数本节内容六、红细胞沉降率测定七、红细胞形态检查一、红细胞计数（RBC）红细胞计数（RBC）是测定单位容积血液中红细胞数量。RBC与血红蛋白和血细胞比容结合，常作为诊断贫血、真性红细胞增多症及红细胞增多的主要指标之一。（一）检测原理显微镜法的检测原理：采用等渗稀释液将血液标本稀释一定倍数（200倍）后，充入改良牛鲍血细胞计数板中，在显微镜下计数一定区域（体积）内的红细胞数量，经换算求出每升血液中红细胞数量。（二）操作步

2、骤显微镜法准备稀释液：取一试管，加入红细胞稀释液2ml。采血和加血：准确采集末梢血或吸取新鲜静脉抗凝血10μl，加至上述稀释液中，立即混匀。充池：准备计数板、充分混匀稀释液、充池，室温静置2～3min，待细胞下沉。计数：高倍镜下计数中央大方格内4角和正中5个中方格内的红细胞数。计算：（三）方法评价常用红细胞计数稀释液组成与作用（四）质量保证血细胞计数质量保证的关键是控制计数误差。血细胞计数误差可来源于技术误差、仪器误差和技术域误差，可通过减小误差进行红细胞计数的质量控制。血细胞计数误差种类与原因（五）参考区间成年：男性（4.0～5.5）×1012/L，

3、女性（3.5～5.0）×1012/L。新生儿（6.0～7.0）×1012/L。（六）临床意义1．生理性变化红细胞数量受到许多生理因素影响，但与相同年龄、性别人群的参考区间相比，一般在±20%以内。红细胞生理性变化与临床意义2．病理性变化（1）病理性增多（2）病理性减少：见于各种原因导致的贫血贫血是指外周血中单位体积内血红蛋白（Hb）、红细胞计数（RBC）和（或）血细胞比容（HCT）低于参考区间下限。病因不同可将贫血分为3大类。此外，药物也可引起贫血。1）红细胞生成减少：①骨髓功能衰竭的再生障碍性贫血、急性造血功能停滞等。②造血物质缺乏或利用障碍，如肾性

4、贫血、缺铁性贫血（铁缺乏）、铁粒幼细胞贫血（铁利用障碍）、巨幼细胞贫血（叶酸、维生素B12缺乏性DNA合成障碍）等。2）红细胞破坏过多3）红细胞丢失（失血）：如急性、慢性失血性贫血。红细胞破坏过多的原因与临床意义引起贫血的药物与机制二、血红蛋白测定（Hb或HGB）血红蛋白是在人体有核红细胞及网织红细胞内合成的一种含色素辅基的结合蛋白质，是红细胞内的运输蛋白。每个Hb分子含有4条珠蛋白肽链，每条肽链结合1个亚铁血红素，形成具有四级空间结构的四聚体，以利于结合O2和CO2。（一）检测原理HiCN法检测原理：血红蛋白（SHb除外）中的亚铁离子（Fe2+）被高

5、铁氰化钾氧化为高铁离子（Fe3+），血红蛋白转化成高铁血红蛋白（Hi）。Hi与氰化钾（KCN）中的氰离子反应生成HiCN。HiCN最大吸收波峰为540nm，波谷为504nm。在特定条件下，HiCN毫摩尔消光系数为44L/（mmol•cm）。HiCN在540nm处的吸光度与浓度成正比，根据测得吸光度可求得血红蛋白浓度。十二烷基硫酸钠血红蛋白（SDS-Hb）检测原理：SDS作为一种阴离子表面活性剂，具有轻度氧化作用。血液中除SHb以外的所有血红蛋白均可与低浓度的SDS作用，亚铁血红素被氧化成稳定的棕红色高铁血红素样复合物（SDS-Hb），最大吸收峰在538

6、nm。（二）操作步骤1、氰化高铁血红蛋白测定法（直接定量测定法）准备转化液：取一试管，加入5mlHiCN转化液。采血与转化：采集全血20μl，加到盛有转化液的试管底部，与转化液充分混匀，静置5min。测定吸光度：用符合WHO标准的分光光度计，在波长540nm处、光径为1.000cm、以HiCN试剂调零，测定标本的吸光度（A）。计算：2．十二烷基硫酸钠血红蛋白测定法制备标准曲线：取4份不同浓度抗凝血分别用HiCN法及本法测定每份血液的血红蛋白浓度和吸光度，以HiCN法测得的血红蛋白浓度为横坐标，本法测得的吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。测定：取应用液5ml

7、于试管中，加入全血20μl充分混匀。5min后置538nm下以应用液调零，测定其吸光度，查标准曲线即可得出血红蛋白浓度。（三）方法学评价HiCN测定法是WHO和国际血液学标准化委员会ICSH推荐的参考方法，由于HiCN试剂含有剧毒的氰化钾，各国均相继研发出不含氰化钾的血红蛋白测定方法，有的测定法已用于血液分析仪，但其标准应溯源到HiCN量值。血红蛋白测定的方法学评价HiCN转化液的作用与评价（四）质量保证（五）参考区间成年：男性120～160g/L，女性110～150g/L。新生儿：170～200g/L。（六）临床意义与红细胞计数相似，但判断贫血程度优

8、于红细胞计数。根据Hb浓度可将贫血分为4度：轻度贫血：Hb＜120g/L（女性Hb＜110g/