发酵中试操作规程

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1、04P1发酵中试操作规程一.灭菌操作（一）准备1.打开控制器电源、电脑电源后，控制系统自动打开；2.检查所有阀门是否关闭，盖紧罐盖上各种盖帽，旋紧罐盖上压紧螺栓；3.预先启动蒸汽发生器及空气压缩机，将控制器中的温度控制设置为手动。4.标定pH、DO电极，将电极插入罐体侧面的传感器口并及时的锁紧螺母，确保安装妥当防止高压下传感器弹出伤人。将从罐体传感器口取下的不锈钢塞放到指定位置。5.确定发酵罐底阀已经关紧，倒入培养基，调整pH值，加消泡剂，旋紧投料口。注：氯离子对不锈钢会带来不可逆转的破坏，因此应避免用盐酸溶液调节pH，如工艺上无法避免加盐酸，应控制盐

2、酸溶液浓度不大于5%且在添加过程中不得直接接触不锈钢。（二）培养基预热1.打开排气阀，打开夹套冷凝水阀排尽夹套水，关闭其它阀门。拔掉冷凝器的出水管，以防冷凝器中水受热膨胀。2.启动反应器搅拌马达。调转速100~200Rpm.（注意：开启搅拌时，应先按下搅拌开关，再设置好转速，最后将控制方式改为“自动”）3.蒸汽进夹套：缓缓打开夹套蒸汽阀蒸汽进夹套（注意：此时有轻微爆破声属正常，如声音过响，则开阀的速度应减慢）。待排水总口排出蒸汽时调节冷凝水阀，控制蒸汽排出量以有少量蒸汽冒出即可，并控制夹套内压力不超过0.2Mpa。当培养基预热至98℃时，进入灭菌操作。

3、在培养基温度在80~90℃时可以适当的减慢升温速度，在本温度区域可以杀灭大部分的微生物。4.蒸汽进取样阀:打开出料阀(关紧底阀),打开罐底蒸汽阀,蒸汽进入取样阀内腔,当出料阀排尽冷凝水后应调节其开度,以有少量蒸汽排出即可。（三）灭菌1.蒸汽进过滤器：关闭夹套蒸汽，适当降低搅拌速率，微开过滤器上的两个排冷凝水阀，打开过滤器前蒸汽阀，缓缓打开空气管线切断阀，让蒸汽进入罐体，当空气过滤器上两个冷凝水阀出口冷凝水很少时，调节这两个冷凝水阀以有少量蒸汽排出为宜。当排气口有蒸汽排出或罐温到达100℃两分钟后，关闭排气阀。打开底阀，蒸汽进罐(开阀时观察视镜处培养基翻

4、动的变化，以有少量的变化为宜）.当罐温达到100℃以上时,培养基中的溶氧接近零,可以标定溶氧的零点。2.当达到预定温度（121℃）或罐压，开排气阀至有蒸汽排出，打开接种阀，打开冷凝水阀，根据罐压或罐温变化的趋势，及时调节蒸汽阀。阀门调节宜微调应避免大幅度开关。当反应器罐压或罐温维持在预定的范围内开始计时。3.保温开始后，排气阀蒸汽排量不宜太小，否则可能导致液面以上的罐体部分尤其罐盖达不到消毒温度。4.移种管线消毒(适用于多级发酵)在保温过程中打开移种管线阀及发酵罐受种阀，保温结束前关闭受种阀和移种管线阀。（四）灭菌完成及降温（先开后关，后开先关）3-3

5、04P11.关闭冷凝水阀，旋紧接种口，旋紧底阀，再关紧取样器的蒸汽阀。旋紧出料阀。2.关紧夹套蒸汽及夹套排水阀，关紧空气管线切断阀及冷凝水阀，关紧过滤器前蒸汽阀，全开空气阀，空气经过滤器进入发酵罐。3.当温度降至90℃以下后，在控制器中将温度设定为预定温度并将控制方式设定为“自动”，发酵罐进入自动降温。适当调高搅拌转速。4.在降温过程中，始终监视罐压，严禁压力掉零。当温度到达工艺要求时，调节搅拌转速、空气流量、开空气进罐底阀，调整罐压、标定溶氧电极斜率及校正pH电极的零点。注意事项：1.消毒前必须排尽排气冷凝管中的水；2.消毒后，空气应缓缓通入过滤器；

6、3.操作过程中不要面对有蒸汽喷出的管口，以免被烫伤。二.发酵操作（一）准备1.溶氧电极标定:调节空气流量、罐压、搅拌转速、罐温（为了保证工艺参数的可比性，建议上面四参数维持一个固定值），待所有参数稳定后，标定溶氧电极斜率为100%，2.pH电极零点校正:高温消毒后pH电极的零点或多或少都会发生漂移,应预校正。取样用外源pH电极精确测定培养基的pH值，根据精确测定值与在线的pH值的差值在标定菜单中直接修改零点，使在线值等同精确测量值。（二）接种：1.摇瓶倒种:调节进气量至0.2VVM，开排气阀至罐压接近零（不得大于0.02Mpa），预先旋松接种口，在接种

7、口处放好酒精棉并点燃，打开接种口，倒入种子，然后旋紧接种盖，立即调高罐压。最后将酒精棉，摇瓶等及时清理掉。2.差压移种:移种管线消毒:检查受种阀并关紧,开冷凝水阀，开种子罐出料阀，开移种管线蒸汽阀，开移种管线切断阀，当管道冷凝水排尽后调节冷凝水阀以有少量蒸汽排出为宜。消毒30分钟后，关紧冷凝水阀，关紧蒸汽阀，并立即开受种阀，用发酵罐中的空气对移种管线进行保压。等移种管线冷却后就可以移种。差压移种：调整种子罐与发酵罐的压力，维持种子罐罐压大于发酵罐罐压约0.05Mpa,开种子罐罐底阀，种液进入发酵罐。移种结束必须立即关紧受种阀，并调高发酵罐罐压。移种管线

8、应及时用蒸汽清洗，防止堵塞，操作同移种管线的灭菌操作。3.接种后，开排气过滤器的冷凝器冷却水。