双水相体系提取欧李种仁蛋白的初步研究.pdf

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1、第33卷第3期2014年3月种子(Seed)双水相体系提取欧李种仁蛋白的初步研究李佳，苟兰亭，陈俊，邬晓勇，苟小军(成都大学药食同源植物资源开发重点实验室，四川成都60106)PrimaryStudyonExtractionofSeedProteinfromPrunushumilisbyAqueousTwo—phaseSystemLIJia，GOULan-ting，ChenJun，WuXiao-yong，GOUXiao-jun摘要：筛选优化了聚乙二醇(PEG)／硫酸铵双水相的质量分数、破坏，而且具有分离速度快、耗能小、成本低、回收率分配系数、回收率等影响因素，

2、得到了欧李种仁蛋白的最佳萃高、易于放大和可连续化操作的特点J。取条件：在30％硫酸铵、22％聚乙二醇条件下，分配系数最小，与其它常用的纯化蛋白的方法相比，双水相萃取达0．0877，回收率为95．8％。并对此体系的最大萃取容量进技术分离纯化蛋白质具有以下优势：体系含水量行测定。结果表明，双水相易于放大和进行连续性操作，适于高，可达80％以上；蛋白质在其中不易变性；界面张力大规模生产蛋白。远远低于水，有机溶剂两相体系的界面张力，有助于强关键词：欧李；种仁蛋白；双水相萃取；优化；放大操作中图分类号：S662．5文献标志码：A化相际问的质量传递；分相时间短，一般只需5

3、一l5文章编号：1001—4705(2014)03-0082-05min；易于放大和进行连续性操作；萃取环境温和，生物相容性高；聚合物对蛋白质的结构有稳定和保护作用欧李(PrunushumilisBunge)为蔷薇科樱桃属落等。正是由于双水相萃取技术的诸多优势，现已被广叶小灌木，我国特有的果实和药用兼用的树种，其茎泛用于蛋白质、核酸、氨基酸、多肽、细胞器等产品的分叶、果实、根皮具有很高的经济及药用价值¨j，原生长离和纯化。于北方边远山区等一些人口稀少的艰苦地区，其植株在蛋白质的分析研究方面，已做了大量的工作，蛋外形较小，株高0．5～1．0m，叶芽密集，枝条细密

4、，花白质的分离纯化方法比较完善，但国内对欧李蛋白质颜色白色或粉色。结实很早，果实和樱桃果实很相似，分离提取工艺研究较少，所以应该对欧李蛋白质分离味道和李子相似，酸甜合适，果实营养非常丰富，有核，提取工艺进行系统的研究并完善。本实验采用双水相果实呈圆形，单个果实重5—15g，果实颜色呈黄色、红萃取技术通过筛选优化试验因素，建立了提取欧李种仁色或紫红色，被称为“绿色天然钙粉”_2J，可以生食，也蛋白的双水相体系对欧李种仁蛋白进行分离和纯化。可用于深加工。果实汁液深红色，出汁率高，是加工果1材料与方法汁的优质材料。欧李种仁还可以药用，具有利尿、助消化等功效，能治疗消

5、化不良、水肿、肠胃停滞等疾1．1实验材料病。欧李果实中含有丰富的矿物质、维生素、糖、蛋挑选籽粒饱满、大小均匀成熟的欧李种子，手工剥白质、氨基酸等营养物质，蛋白的提取与分离通常采用去外壳后，将种仁研磨成粉末，用石油醚脱脂风干后用硫酸铵沉淀法，但过高浓度的盐离子容易破坏蛋白质Tris．HC1缓冲溶液浸泡，离心得到蛋白质溶液，冷藏的活性及其构象；而双水相法利用聚乙二醇(PEG)／备用。无机盐体系的水溶液所形成的互不相容的双水相，通1．2仪器与试剂过选择适宜的成相与分配条件，使蛋白质(酶)菌体精密电子天平，uV一1800分光光度计，50mL滴定等生物大分子在两相中具有

6、不同比例的分配，从而使管，移液管考马斯亮蓝G-250，标准牛血清蛋白，PEG其得到分离与纯化_4J，这不仅为生物活性物质的提取4000，硫酸铵，石油醚，乙醇，NaC1，95％乙醇，85％磷提供了温和的环境，使其活性及构象在提取时不易被酸，Tris—HC1缓冲溶液。1．3方法1．3．1试剂配制收稿日期：2013—11—08基金项目：成都大学校基金资助项目(编号：2011xJZ18)。考马斯亮蓝G-250溶液的配制：精确称取100mg作者简介：李佳(1993一)，女，四川营山县人；研究方向：生物工程。通讯作者：邬晓勇，E-mail：cduwxysyx@126．co

7、m。考马斯亮蓝G-250，溶于盛有50mL95％乙醇的·82·问题探讨李佳等：双水相体系提取欧李种仁蛋白的初步研究1000mL容量瓶中，并加入100mL85％浓磷酸，然后，Yb=下相蛋白质浓度／上、下相总浓度用蒸馏水稀释并定容至刻度线。=CbVb／(CtVt+C6、Vb)牛血清蛋白溶液的配制：精确称取0．06g牛血清式中：Ct、Cb分别代表上、下相蛋白质浓度；蛋白，加入0．526gNaC1，溶于含有少量蒸馏水的500、分别代表上、下相体积。mL容量瓶中，然后用蒸馏水稀释定容至刻度线，混匀，1．3．4双水相体系相图的制备即为120g／mL的牛血清蛋白原液。配制质

8、量分数35％的硫酸铵溶液：精确称取硫酸