农杆菌感受态制作和转化.doc

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1、农杆菌感受态制作1.取保存的菌种，在含相应抗生素的YEB固体培养基上划线，28℃、培养24~36h至长出单菌落。2.挑取农杆菌单菌落，接种于5ml含有相应抗生素的液体YEB培养基内。28℃、250rpm培养24~36h，至菌液OD600约0.5~0.63.按2%体积，将菌液加入含相应抗生素的液体YEB培养基中，28℃、250rpm培养至OD600为0.5~0.6。4.4℃、5000rpm离心10min，收集菌体。5.加入和扩大培养时培养液相同体积的70mmol/LCaCl溶液，重悬。6.4℃、5

2、000rpm离心10min，收集菌体。7.加入体积为扩大培养时培养液1/10的70mmol/CaCl溶液，重悬。8.分装为100μL的小分，至于冰上备用。9.若要冻存，需加入终浓度为15%~20%的甘油。-80℃冻存。注：4~9步请注意无菌操作！