新型复合酶在肉鸡饲料中的应用.doc

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1、新型复合酶在肉鸡饲料中的应用    在家禽饲养上，随着玉米供给量的缺口越来越大，人们逐渐利用小麦、大麦和燕麦等饲料原料代替玉米来饲养家禽，但是当这类原料在家禽日粮中含量过多时，往往会造成饲料利用率差、家禽生长不良以及环境污染等问题，这主要与高木质纤维饲料原料中存在非淀粉多糖抗营养因子有关，这些抗营养因子会增加消化道食糜粘性，影响消化道生理形态，阻碍营养物质消化吸收，降低饲料转化率，影响肠道菌群，对家禽的健康成长造成不利的影响。消除抗营养因子的方法很多，主要包括物理方法、化学方法及生物方法。非淀粉多糖酶作为一种“绿色”添加剂，被认为是目前消除非淀粉多糖抗营养因

2、子最有效的方法之一。饲料中的非淀粉多糖降解酶，主要包括木聚糖酶、纤维素酶、木糖苷酶等。从整个世界范围来看，饲料酶的添加率不足60%，而在中国尚不足20%，饲料酶的应用还具有很大的上升空间。研究结果表明，在禾本植物纤维中，反式阿魏酸（4一羟基-3-甲氧基肉桂酸，ferulicacid．简称FA）是含量最多的酚酸，在谷物的细胞壁中，反式FA主要是以酯键与半纤维素连接。半纤维素中的FA、双FA含量及连接方式决定了细胞的延长性、可塑性及降解性，因此断裂FA与半纤维素连接的酯键是提高半纤维素降解程度的重要因素。阿魏酸酯酶（EC3.1.1.73．feruloyleste

3、rase，简称FAE），是重要的细胞壁降解酶，其主要生物功能是水解多糖与FA连接的酯键，释放FA。目前国内的发酵饲料中还未有添加FAE的报道。课题组的前期研究结果及已有报道都表明，木聚糖酶及FAE能够共同降解植物细胞壁，  同时释放FA和低聚木糖(xylooligosaccharide．简称XOS)。XOS其无毒安全的特性，已成为最具潜力的动物保健品和抗生素替代品…1。FA具有抗菌、抗炎、抗氧化、抗突变、抗癌、抗动脉粥样硬化、抗血栓、降低胆固醇和降血脂等生理功能，在日本，反式FA已应用于食品添加剂中I121。随着畜牧业的迅速发展，研发高质量的饲料已经成为国内

4、外研究的热点。另外，随着经济社会的发展，抗生素的危害已经越来越为人们所熟知，抗生素的少用或者不用是必然的发展方向。    作者主要报道了实验室自行发酵的FAE及商品饲料酶一溢多酶(主要含木聚糖酶(25000U/g)、纤维素酶(800U/g)、甘露聚糖酶（2000U/g）、B一葡聚糖酶(30000U/g)、α一淀粉酶(U/g))酶解解麦糟的工艺，及将酶解后的麦糟添加于饲料中饲喂肉鸡的实验结果。1.材料与方法1.1材料1.1.1  主要试剂  反式阿魏酸标准品：Sigma公司产品；阿魏酸甲酯：华侨大学曾庆友老师自行合成：低聚木糖标准品、木二糖标准品：日本和光纯药

5、工业株式会社产品；葡萄糖标准品：上海国药化学试剂有限公司产品；溢多酶AF831:广州溢多利公司产品；玉米及豆粕：厦门市振裕饲料有限公司产品：预混料：厦门百惠行科技有限公司产品；麦糟：厦门青岛啤酒厂产品。1.1.2仪器  Agilent1100高效液相色谱仪：美国安捷伦公司产品；HPX-42A柱：美国Bio-Rad公司产品；ODS-C18色谱柱：美国Thermo公司产品：SP-2102UV紫外可见分光光度计：L海光谱仪器有限公司产品；超滤膜包Viva.flow200:北京赛多利斯仪器有限公司产品。1.1.3  菌种黑曲霉：作者所在实验室筛选保藏。1.1.4鸡苗

6、  青脚麻鸡：厦门五显镇三秀种禽厂提供。1.2培养基及其培养条件1.2.1  种子培养基PDA培养基，36℃培养2d。1.2.2发酵培养基将麦糟烘干过65目筛，按m（麦糟）：m（麦麸）=4：1的比例，每个搪瓷盘中加入麦糟和麦麸的混合物509及75mL营养盐溶液，混匀，121℃灭菌30min。每个搪瓷盘中接种12.5ml菌液，33℃培养6d。    营养盐溶液：蛋白胨29，酵母粉49，NaH2P04'2H201.52g,KH2P04lg,CaC120.3g,MgS04.7H200.3g,Na2HP04"12Hz031.4g,Na2HP04"2H2015.6g，

7、用蒸馏水定容至IL。1.2.3  FAE粗酶液制备    1)发酵培养基抽提将发酵液加入1000mL蒸馏水，置于33℃．180gmin的摇床中振荡2.5h．取出静置，用8层纱布过滤。    2)发酵液浓缩在超滤膜相对分子质量为30000，进口压力为0.1MPa，进料速度为200mL/min,20℃操作条件下，超滤浓缩，浓缩后的FAE酶活达到20U/mL以上。以上。1.3  各种物质测定方法1.3.1  FA测定  按文献方法分析I131。1.3.2 XOS测定  按文献方法分析I13I。1.3.3  还原糖测定  采用DNS法114l。1.4复合酶酶解麦糟工

8、艺研究1.4.1  FAE添加量对麦糟酶解效果的影响