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1、细胞化学与组织化学实验须知1．自觉遵守课堂纪律,维持课堂秩序,不迟到、不早退,保持整洁、安静、有序的实验环境。2．认真预习实验课内容熟悉实验目的、原理和方法，了解所需使用仪器。3．实验台面保持整洁，书包等物品按规定放置整齐，仪器、药品摆放整齐、有序，公用试剂用毕,物归原处。地面及水池内不得乱丢废物。4．使用药品、试剂和各种药品注意节约，爱护器材。洗涤和使用仪器时应仔细，防止损坏仪器。严格遵守仪操作规程，在未知正确操作程序时，不要独自使用，须在老师的指导下进行。5．实验废弃物、毒害性实验材料应倾倒在指定地点，统一处置。6．实验时一律穿工作服，不允许穿拖鞋进实
2、验室，以免溅落的腐蚀性药品或掉下的玻璃器皿伤及裸露的皮肤。7．节约水、电、气，燃气灯应随用随关。最后离开实验室时，要将室内检查一遍，关好水、电、气，锁好门窗。8．实验室内一切物品，未经本室负责教师批准，严禁携出室外。借物必须办登记手续。9．实验结束，将实验记录交指导教师审阅并做好室内清洁工作。实 验 报 告 格 式实验(编号)(实验名称)1.实验目的和要求2.实验内容3.实验原理4.实验操作方法(或步骤)5.实验结果与分析实验一 细胞内碱性蛋白的显示-组蛋白的显示南昌大学生命科学学院主讲:范丽华一、实验目的掌握细胞内碱性蛋白的鉴别方法并了解碱性蛋白在细胞内
3、的分布。学会制作血涂片并掌握制作技巧。二、实验原理由于不同的蛋白质分子所带的碱性和酸性基团的数目不同，在pH值不同的溶液中，蛋白质分子所带的净电荷多少不同。如在生理条件下，整个蛋白质所带负电荷多，则为酸性蛋白质；带正电荷多，则为碱性蛋白质。据此，可将标本经三氯醋酸处理提出核酸后用不同pH值的固绿染液分别染色，细胞内的酸性蛋白和碱性蛋白质显示出来。三、实验用品1．材料鲫鱼2．试剂1)carnoy固定液(无水乙醇：氯仿：冰醋酸按6：3：1配制)一次配制1L.2)0.1%碱性坚牢绿染液：取0.1g坚牢绿加入100毫升蒸馏水，再加少量0.1MNaoH调节pH至8.
4、0-8.1.3)5%三氯醋酸4)70%乙醇5)香柏油3．器材解剖盘，注射器，载玻片，显微镜,水浴锅等。四、实验方法1．将鲫鱼放入盘中，尾静脉取血,滴一滴血在干净载玻片一端，推片，按此法制备二张血涂片，室温晾干。2.将涂片作好标记放在现配制的Carnoy固定液中固定10分钟，室温晾干。3．放入现配制的5％三氯醋酸中90℃(10-15分钟)，抽提出核酸。4.将玻片放在70%乙醇中5-10分钟．清水冲洗多次（3分钟以上），以冲去痕迹的三氯醋酸。5．滤纸吸干玻片上水分。6.一张片放入0.1％碱性固绿(pH8.0～8.1)中染色15～20分钟。7．清水冲洗（3分钟）
5、，盖上盖片镜检。对照片不进入5％三氯醋酸中抽提出核酸。其他步骤同上。.五、实验中注意事项(1)用5%TCA提取DNA是该实验中的关键。DNA必须被提取，以使染色质的负电荷下降，用热TCA提取核酸后，酸性染料（固绿）在碱性pH下，碱性蛋白可以选择性地被染色，如未被提取，不能染色，或整个切片染成蓝绿色，水洗或进入酒精即褪色。(2)染液pH必须高（pH8.0~8.1），从而使其他蛋白质染色极微。六、血涂片的制作１.取一滴鲫鱼新鲜的血液，置于玻片的一端，以左手拿该片的两端，迅速用右手拿住另一载玻片的一端，在左手载玻片上由前向后接触血滴，使两载玻片约成４５°角，轻轻
6、移动，使血滴成一直线，然后由前向后推为一均匀的薄片。２.室温下自然晾干。待晾干后进入到Ｃａｒｎｏｙ固定液中进行固定。注意：在制作血涂片的过程中要用力均匀，避免来回推拉及刮片．好的血涂片在显微镜下观察到的细胞应成单层均匀排列。人 血 涂 片七、相关理论知识１．家畜血涂片。低倍镜下观察可见大量圆形而细小的红细胞。白细胞很少，稀疏地散布于红细胞之间，选白细胞较多的部位（一般在血膜边缘和血膜尾部，因体积大的细胞常在此出现）。红细胞:呈圆盘状,边缘厚,中间薄,无核。中性粒细胞:是白细胞中较多的一种,体积比红细胞大,核呈杆状(为幼稚型,胞核细长,弯曲盘绕成马蹄形,S形
7、,W形或U形等多种形态)或分叶状,一般分3~5叶或更多，跟该细胞年龄有关。淋巴细胞：有大中小三种类型，其中小淋巴细胞最多，血膜上很易看到，体积与红细胞相近．具核，核大而圆．大淋巴细胞在正常细胞中不常见到，体积与单核细胞相近或略小，胞核圆形，胞质较小淋巴细胞多。嗜酸性粒细胞：比中性粒细胞略大，数量少，胞核常分两叶．嗜碱性粒细胞：数量很少体积与嗜酸性粒细胞相近或略小．胞核呈Ｓ形或双叶状．单核细胞：是白细胞中体积最大的一种，胞核呈肾形，马蹄形或不规则形．细胞质丰富．血小板：体积小，常三五成群散布在红细胞中．２．家禽血涂片．鸡血的有形成分与其他家畜比较有以下不同:
8、１）红细胞，呈椭圆形，中央有一椭圆形的细胞核．２）中性粒细胞，又称
