聚合酶链反应(PCR)

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1、第六节聚合酶链反应(PCR) 述：目前，采用PCR获取目的DNA十分广泛，应用这一技术可以将微量的目的DNA片段在体外扩增100万倍以上。一、PCR的基本工作原理述：以拟扩增的DNA分子为模板，以一对分别与模板5'末端和3'末端相互补的寡核苷酸片段为引物，在DNA聚合酶的作用下，按照半保留复制的机制沿着模板链延伸直至完成新的DNA合成，重复这一过程，即可使目的DNA片段得到扩增。1．组成PCR反应体系的基本成分模板DNA、特异性引物、DNA聚合酶（具耐热性）、dNTP以及含有Mg2+的缓冲液。2．PCR的基本反应步骤1）变

2、性——将反应系统加热至95℃，使模板DNA完全变性成为单链，同时引物自身和引物之间存在的局部双链也得以消除；2）退火(anneal)——将温度下降至适宜温度（一般较Tm低5℃）使引物与模板DNA退火结合；3）延伸：将温度升至72℃，DNA聚合酶以dNTP为底物催化DNA的合成反应。述：上述三个步骤称为一个循环，新合成的DNA分子继续做为下一轮合成的模板，经多次循环（25～30次），所产生的DNA以指数方式增加，即进行n次循环，拷贝数就增加2n倍，这样就可达到扩增DNA片段的目的。生化6版第22章常用技术幻灯12－16二、P

3、CR技术的医学应用（一）目的基因的克隆和DNA序列的测定（二）在传染病诊断中的应用（三）在肿瘤基因检测中的应用（四）在遗传病诊断中的应用（五）在法医鉴定中的应用