【同济医科大学】优质课《医学微生物学》 第19章-医学弧菌病毒知识

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【同济医科大学】优质课全国特级教师江新欢博士教授《医学微生物学》第19章弧菌科及检验

12022/6/132弧菌科共同特征革兰阴性菌，短小弯曲弧状,无芽胞，多数有鞭毛、有菌毛。需氧兼性厌氧具有一端单一鞭毛、运动迅速氧化酶＋发酵葡萄糖产酸不产气,许多菌株生长需要2%~3%氯化钠弧菌科细菌广泛分布于自然界，以水中最为多见。其中有一些种对人类致病。

22022/6/133弧菌科种类弧菌属气单胞菌属邻单胞菌属

32022/6/134三个菌属的鉴别试验弧菌属气单胞菌属邻单胞菌属肌醇－－＋粘丝试验＋/(－)－－鸟氨酸＋/－－＋精氨酸＋/－＋/－＋150μgO/129SRSTCBS生长＋－－耐盐（7％）＋/－－－

4第一节弧菌属弧菌属共有36个种。其中有12个种与人类感染有关霍乱弧菌引起霍乱副溶血弧菌引起食物中毒

5临床意义主要引起人类腹泻，也可导致肠道外感染如伤口感染、败血症等氧化酶均阳性除麦氏弧菌外能发酵葡萄糖，对弧菌抑制剂O/129敏感钠离子能刺激其生长，有些菌种在无盐条件下不能生长，称为嗜盐菌多数能在血平板或普通琼脂平板上生长，在血平板上可呈现α、β或不溶血菌落。在肠道选择性培养基上如含乳糖或肌醇的麦康凯平板，许多致病性弧菌可以生长，形成糖类不发酵的菌落

62022/6/137霍乱弧菌（VP）引起烈性肠道传染病霍乱的病原体O1（古典生物型和ElTor生物型）、O139O139是新的流行菌株

72022/6/138霍乱弧菌分类根据菌体抗原（O抗原）不同分成200多个霍乱弧菌血清群，其中：O1群霍乱弧菌：根据菌体抗原成分不同分成3个血清型：ABcc小川型、AC稻叶型、ABC彦岛型,以小川型和稻叶型为常见流行型别非O1群霍乱弧菌：除O1外余下的霍乱弧菌统称(不凝集弧菌，NAG)

82022/6/139霍乱病原体古典型霍乱弧菌（CVC）：1817-1923年引发6次霍乱弧菌世界大流行(正霍乱弧菌)埃尔托型霍乱弧菌（EVC）：1961-至今第7次世界大流行(副霍乱弧菌)O139霍乱弧菌（BVC）:1992年-至今引发O139型霍乱

92022/6/1310

102022/6/1311O1与O139霍乱病原菌特征在外界环境中存活能力霍乱O139弧菌强于O1群霍乱弧菌EVC，EVC强于CVC与O1群霍乱弧菌EVC一样，霍乱O139也有产毒株与非产毒株之分O139霍乱弧菌产毒株所致疾病的临床表现和体征与O1群霍乱弧菌所致霍乱无区别

112022/6/1312霍乱病原体的致病因子毒素：霍乱肠毒素CT、辅助霍乱肠毒素Ace定居因子：脂多糖LPS、毒素协同调节菌毛A

12致病机制正常情况下，胃液中的胃酸可消灭食物中的霍乱弧菌但在胃酸降低时，或摄入大量的霍乱弧菌时，霍乱弧菌可以从胃进入肠道。进入肠道的霍乱弧菌通过鞭毛运动穿过肠粘膜表面的粘液层，通过菌毛定植于肠粘膜上皮细胞表面繁殖产生由染色体介导的对热不稳定的霍乱毒素（CT）而致病O1群和O139群的致病机制和过程是一样的

132022/6/1314CT的致病机理典型的A、B亚单位型外毒素A亚单位为毒性成份，B亚单位与肠壁细胞GM1受体结合，释放A亚单位入细胞A亚单位激活胞内的腺苷环化酶，使胞内环磷酸腺苷（cAMP）浓度升高，细胞分泌增加，大量肠液积聚，形成严重水样便和脱水休克，循环衰竭而死亡

14作用机制示意图

152022/6/1316霍乱流行病学特点（1）霍乱（O139与O1群霍乱），具有传染性强、传播迅速、易出现暴发和流行特征；世界卫生组织将其纳入霍乱范畴，我国将它列入法定报告的甲类烈性传染病霍乱弧菌主要通过水、食物、日常生活接触和苍蝇传播，以食物传播为主，常可借助食用被霍乱弧菌污染的食物而致病

162022/6/1317霍乱流行病学特点（2）霍乱发病季节在夏秋季，本市主要在5-10月份，7-9月为发病高峰人群普遍易感，在同源感染因素下易造成爆发和流行

172022/6/1318霍乱预后及危害霍乱能引起机体剧烈吐泻、失水、电介质紊乱以致死亡病死率高低与病情轻重以及医疗条件、抢救的时效性有关。病情重、医疗条件差、抢救不及时病死率可高达20%-50%

182022/6/1319霍乱预后及危害霍乱属烈性传染病，一旦爆发和流行，累及面广，病死率高，对人民身体健康以及国民生活、生产秩序、社会稳定、投资环境、对外贸易等造成直接影响

192022/6/1320O139霍乱发源地1992年9月19日印度南部城市马德拉斯，12月孟加拉国出现流行影响全印度，继而扩散到泰国、中国（1993年）等亚洲国家似乎来源于埃尔托生物型

202022/6/1321O139霍乱弧菌定义印度株（MO45）耐O/129对IV噬菌体不裂解命名为O139群霍乱弧菌

212022/6/1322O139霍乱弧菌病原体来源EVC流行株O抗原变异?非O1霍乱弧菌获产毒基因?

222022/6/1323全国霍乱O139流行情况（1）1992年在印度、孟加拉首次发现霍乱O139后，短期内在这两个国家造成流行，发病人数高达10多万例，并在几年间已传入亚洲、欧洲、美洲等20多个国家1993年传入我国后，即在新疆南部柯坪县发生霍乱O139引起的暴发，报告病例数202例，死亡4例

23霍乱弧菌检验程序标本增菌培养碱性蛋白胨水分离培养（TCBS、碱性平板）生化鉴定分型血清学鉴定确诊报告初步报告快速诊断直接涂片动力、制动试验

242022/6/1325微生物检验－标本采集发病早期采集标本以“米泔水”样便为主，及时送检卡－布培养基保存严密包装，专人送检

252022/6/1326检验方法－显微镜检查涂片染色：-标本直接涂片革兰染色，注意形态、排列动力观察：-压滴法或暗视野镜检，注意运动方式制动试验：-诊断血清与菌体结合，动力消失

262022/6/1327形态染色革兰阴性弧形或逗点状单鞭毛，运动呈“穿梭样”或“流星样”无芽胞，无荚膜（O139有薄的荚膜）在新鲜粪便中成“鱼群样”排列

27

282022/6/1329霍乱弧菌电镜照片

29霍乱弧菌革兰染色鞭毛染色

302022/6/1331培养特性兼性厌氧营养要求不高耐碱不耐酸，常用pH8.4－9.2碱性培养基在液体培养基中形成菌膜菌落圆形、较大、扁平

312022/6/1332霍乱弧菌常用培养基碱性蛋白胨水碱性琼脂平板硫代硫酸钠-枸櫞酸盐-胆盐-蔗糖琼脂平板（TCBS）霍乱弧菌发酵蔗糖产酸，菌落呈黄色4号琼脂、庆大霉素琼脂平板（含亚碲酸钾）生长并将培养基中的碲离子还原成元素碲,形成灰褐色菌落中心

322022/6/1333

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342022/6/1335分离培养标本接种碱性蛋白胨水增菌6－8小时，转种TCBS或庆大霉素琼脂，TCBS：出现黄色菌落庆大霉素琼脂：出现中心灰褐色的菌落

352022/6/1336鉴定生化反应：氧化酶、粘丝试验、霍乱红反应发酵蔗糖，动力阳性赖氨酸、鸟氨酸脱羧酶阳性，精氨酸双水解酶阴性可以在无盐培养基上生长在含有高于6%氯化钠的培养基上不能生长确定血清群：O群诊断血清与可疑菌落作玻片凝集，以确定是否为O1或O139群确定血清型：与分型诊断血清作玻片凝集，以确定血清型别确定生物型：CVCEVC第Ⅳ组噬菌体裂解试验(106)：+-/(+)多粘菌素B敏感试验(50U)：SR鸡红细胞凝集试验(2.5%):-/(+)+/(-)V-P试验、溶血试验(1%羊)：-+/(-)

36抵抗力可在河水、井水及海水中存活20天左右对热、干燥和光敏感；100℃1~2min即死亡怕酸耐碱，在正常胃酸中仅能生存4min对常用消毒剂敏感，0.5ppm氯15min能杀死对庆大霉素耐药

372022/6/1338副溶血性弧菌

382022/6/1339副溶血性弧菌－生物学性状革兰阴性杆菌，或微弯，单端鞭毛，无芽胞，无荚膜营养要求不高，嗜盐性，最适盐浓度3.5％NaCl，超过8%不能生长无盐培养基不生长最适pH为7.7~8.0，但pH9.5时仍能生长，最适生长温度为30~37℃在碱性胨水中经6~9h增菌可形成菌膜

39TCBS：形成不发酵蔗糖的绿色菌落神奈川现象＋：致病性副溶血性弧菌能溶解人或兔红细胞，不溶解马红细胞嗜盐性选择平板:较大，圆形，隆起，稍浑浊，半透明或不透明，无粘性SS平板:扁平，无色半透明，蜡滴状菌落，有辛辣味，不易刮下，48h后牢固粘着培养基上，部分菌株不能生长麦康凯平板:部分菌株不生长伊红美兰琼脂和中国兰琼脂培养基不能用于本菌的初次分离2022/6/1340

402022/6/1341副溶血弧菌“副溶血”是为了纪念首次发现时该菌的特殊溶血现象：普通血平板呈r或a溶血，但在含7％高盐甘露醇的人O型血或兔血的平板上呈ß溶血。该溶血现象称神奈川现象。现已证明产生该现象的菌株（KP＋）即为产毒株

41临床意义具有嗜盐性存在于近海的海水、海底的沉淀物、鱼虾类和贝壳及盐渍加工的海产品中主要引起食物中毒和急性腹泻是我国沿海地区及海岛食物中毒的最常见病原菌胃肠炎临床表现有：恶心、呕吐、腹痛、低热、寒战等。腹泻呈水样便，偶尔血性，恢复较快，病程2~3天，通常为自限性还可引起伤口感染和菌血症

42致病物质通过菌毛的粘附毒素耐热直接溶血素(TDH）分子量为21000，有2个亚单位组成，能耐100℃10min不被破坏溶血毒性，TDH对人和兔红细胞的溶血性较高，对马红细胞不溶血细胞毒性，对多种培养细胞如Hela细胞、FL细胞、L细胞及鼠心肌细胞有细胞毒性心脏毒性，可导致心电图异常表现如ST-T改变、房室传导阻滞、室颤或心跳骤停及心肌损伤肠毒性，使肠粘膜的毛细血管通透性增高，向肠腔分泌亢进其结构基因tdh也存在于其他致病性弧菌当中耐热直接溶血素相关溶血素（TRH），生物学特性与TDH相似

43生物学特性1.形态革兰阴性杆菌，有鞭毛（极单毛），无荚膜，无芽胞2.抗原结构耐热的菌体（O）抗原，具有群特征性，副溶血性弧菌的O抗原有13种鞭毛抗原，不耐热，无型特异性

443．培养特性营养要求不高在无盐培养基上不能生长，最适合生长的氯化钠浓度为3.5%，超过8%不能生长最适pH为7.7~8.0，但pH9.5时仍能生长，最适生长温度为30~37℃在碱性胨水中经6~9h增菌可形成菌膜

45TCBS琼脂平板:0.5~2.0mm大小，蔗糖不发酵而呈蓝绿色菌落普通血平板:不溶血或只产生α溶血从腹泻患者中分离到的菌株95%以上在我妻琼脂上产生β溶血现象，称为神奈川现象（KP）嗜盐性选择平板:较大，圆形，隆起，稍浑浊，半透明或不透明，无粘性SS平板:扁平，无色半透明，蜡滴状菌落，有辛辣味，不易刮下，48h后牢固粘着培养基上，部分菌株不能生长麦康凯平板:部分菌株不生长伊红美兰琼脂和中国兰琼脂培养基不能用于本菌的初次分离

46抵抗力抵抗力弱不耐热，90℃1min即被杀死淡水中不超过2日，但海水中能存活47天以上耐碱怕酸，1%醋酸或50%食醋中1min死亡

47微生物检验1.检验程序

48微生物检验2.标本采集:可采集患者的粪便，肛门拭子和可疑食物。应及时接种，或置碱性胨水或卡-布运送培养基中送检

493.分离培养与鉴定(1)增菌培养标本接种1%NaCl碱性胨水或4%NaCl蛋白胨水中进行选择性增菌(2)分离培养标本直接接种或增菌后接种TCBS平板或嗜盐菌选择平板TCBS平板：绿色或蓝绿色菌落，不透明，直径1~2mm微突起菌落嗜盐菌选择性平板：较大、圆形、隆起，稍混浊、半透明或不透明、无粘性菌落

50（3）鉴定氧化酶阳性，O/129（150μg）敏感发酵葡萄糖、麦芽糖、甘露醇产酸，不发酵蔗糖、乳糖。吲哚试验阳性大部分菌株脲酶阴性，V-P阴性NaCl生长试验在不含NaCl和含10%的蛋白胨水中不生长，在3%和7%NaCl蛋白胨水中生长

51赖氨酸脱羧酶、鸟氨酸脱羧酶阳性，精氨酸双水解酶阴性神奈川现象阳性毒素测定用免疫学方法测定TDH和TRH。用基因探针和PCR方法直接测定毒素基因tdh或trh2022/6/1352

52抵抗力抵抗力弱不耐热，90℃1min即被杀死淡水中不超过2日，但海水中能存活47天以上耐碱怕酸，1%醋酸或50%食醋中1min死亡

532022/6/1354其他致病性弧菌溶藻性弧菌：曾称副溶血弧菌2型，最耐盐细菌，10％Nacl＋，TCBS大、黄菌落,最常见于外耳、中耳感染患者，也常见于伤口感染是弧菌属细菌中耐盐性最强的致病菌

542022/6/1355创伤弧菌：1976年首次被认识。在致病性弧菌中，该菌引起的疾病最为严重，引起的菌血症和伤口感染的病程进展非常快而致命。发酵水杨酸和ONPG阳性感染通常发生在气温较高季节，通过生食海产品，侵入肠粘膜淋巴结和门静脉，侵入血流导致菌血症，死亡率50%青年人好发，特别是酒精性肝功能损伤或免疫缺陷人，与转铁蛋白有关引起创口感染，导致蜂窝织炎，偶尔可侵入血流导致菌血症而死亡。致病机理尚不明确，但产生的胶原酶、蛋白酶和细胞毒素可造成组织严重损害

552022/6/1356其他致病性弧菌河流弧菌：曾称霍乱弧菌F群，腹泻，易于亲水气单胞菌混淆拟态弧菌：曾称霍乱弧菌V群，腹泻霍利斯弧菌：TCBS不生长，腹泻弗尼斯弧菌：极似河流弧菌，腹泻辛辛那提弧菌：败血症

56临床意义临床标本中分离的病原性弧菌都应认为有临床意义特别是从粪便标本中分离到霍乱弧菌O1群、O139群和副溶血性弧菌从任何临床标本分离到创伤弧菌，均应通知临床医师，并根据我国《传染病防治法》有关规定及时作传染病报告，并将报告和菌种一起报送到各级法定部门。

572022/6/1358试验霍乱弧菌拟态弧菌麦氏弧菌霍利斯弧菌海鱼弧菌河弧菌弗尼斯弧菌溶藻弧菌副溶血性弧菌创伤弧菌辛辛那提弧菌沙鱼弧菌精氨酸（１％ＮaＣl）00600959310000000赖氨酸（１％ＮaＣl）991003505000991009957100鸟氨酸（１％ＮaＣl）99990000050955500葡萄糖产气000010010000000麦芽糖9999100010010010010099100100100甘露醇99999600971001001004510050水杨苷109000041951000蔗糖1000100051001009911510050致病性弧菌属生化特性（阳性百分率）

582022/6/1359试验霍乱弧菌拟态弧菌麦氏弧菌霍利斯弧菌海鱼弧菌河弧菌弗尼斯弧菌溶藻弧菌副溶血性弧菌致伤弧菌辛辛那提弧菌沙鱼弧菌氧化酶100100010095100100100100100100100ＯＮＰＧ9490500040350575860硝酸盐991000100100100100100100100100100０％ＮaＣl1001000000000000８％ＮaＣl104400717894800620Ｏ／１２９敏感999590409031019209825100枸橼酸盐97997500931001375210致病性弧菌属生化特性（阳性百分率）

59试验１２３４５６霍乱Vc拟态Vmim麦氏Vmet辛辛那提Vcin霍利斯Vh海鱼Vd河流Vflu弗尼斯Vfur溶藻Va副溶血Vp创伤Vv沙鱼Vcar０％ＮaＣl中生长＋＋－－－－－－－－－－1％ＮaＣl中生长＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋氧化酶－＋＋＋＋＋＋＋＋＋硝酸盐－＋＋＋＋＋＋＋＋＋精氨酸－－－＋＋＋－－－－赖氨酸＋＋＋＋鸟氨酸肌醇－－－＋－－－－－－－－弧菌属的分群鉴定

60气单胞菌属检验程序标本增菌分离培养（血平板、Mac）全面生化反应可疑菌落肠毒素测定初步生化反应涂片染色镜检血标本氧化酶TCBS生长O/129耐盐试验

612022/6/1362气单胞菌属形态染色：革兰阴性杆菌，或球杆状、丝状，极端鞭毛，无芽胞生长条件：兼性厌氧，营养要求不高，生长温度较宽，0℃－45℃，嗜冷菌37℃以下生长，嗜温菌10－42℃生长

622022/6/1363气单胞菌属生长现象：TCBS上不生长，血平板：灰白、光滑、凸起菌落，肠道选择平板：形成不发酵乳糖菌落生化反应：氧化酶＋、触酶＋、发酵葡萄糖产酸产气、6.5％NaCl不生长、O129耐受多数菌株产β-内酰胺酶，对青霉素耐药

632022/6/1364气单胞菌属－临床意义致病物质：溶血毒素、细胞毒素所致疾病：肠道感染是夏季腹泻常见病原菌肠外感染有败血症、伤口感染等

642022/6/1365鉴定依据革兰阴性杆菌，丛鞭毛肠道选择平板上无色透明菌落氧化酶＋、葡萄糖发酵＋O/129：RTCBS：－7.0％NaCl：－

65邻单胞菌属检验程序标本增菌分离培养（血平板、Mac）全面生化反应可疑菌落肠毒素测定初步生化反应涂片染色镜检血标本氧化酶TCBS生长O/129耐盐试验

662022/6/1367邻单胞菌属－主要性状只有一个菌种：类志贺邻单胞菌革兰阴性杆菌，单鞭毛或丛鞭毛，无芽胞，无荚膜兼性厌氧，营养要求不高在SS平板形成不发酵乳糖菌落氧化酶＋，葡萄糖发酵＋O/129：STCBS：不生长，6.5％NaCl不生长赖氨酸、鸟氨酸、精氨酸双水解均＋多数菌株产β-内酰胺酶，对青霉素耐药

672022/6/1368邻单胞菌属－鉴定与志贺菌属鉴别：氧化酶、动力、血清学与气单胞菌属鉴别：O/129S，肌醇试验＋与弧菌属鉴别：Mac、SS生长，TCBS、6.5％NaCl不生长

682022/6/1369邻单胞菌属－临床意义腹泻、食物中毒，多见于夏季败血症、脑膜炎等，多见于免疫力低下者，感染率低，但死亡率高

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