千里光不同浓度乙醇提取物的体外抑菌作用研究

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1、试验研究千里光不同浓度乙醇提取物的体外抑菌作用研究袁婷，张小东（广东省东莞市黄江镇农业技术服务中心，东莞523750）摘要：分别用4种不同浓度的乙醇溶液，通过过滤和乙醚萃取，然后进行冷冻干燥，对千里光粉末进行提取，制备千里光不同乙醇提取物冻干膏，再分别配成一定浓度的生理盐水溶液。用琼脂平板打洞法和试管稀释法，从最小抑菌浓度和最小杀菌浓度等方面，研究了千里光不同浓度乙醇提取物生理盐水溶液对大肠杆菌K88、鼠伤寒沙门氏菌、蜡样芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌ATCC638、肺炎链球菌5种病原菌体外抑菌作用。结果表明，所制备的提取物水溶液对大肠杆菌K88、鼠伤寒沙门氏菌、蜡样杆菌和金

2、黄色葡萄球菌ATCC638没有明显的抑菌作用；对肺炎链球菌抑菌作用很明显，其中以千里光70%乙醇提取物的抑菌效果最好。关键词：千里光乙醇提取物；体外抑菌作用；最小抑菌浓度；最小杀菌浓度DOI:10．3969/J.ISSN．1671-6027．2014．08.012千里光俗名九领光，九里明，千里及，为菊科千里光属植种于5mL培养基中，37℃培养18h，试验前将菌液1∶1000物千里光的全称。千里光全草入药，具有清热解毒，杀虫，明倍稀释。目，凉血，生肌，驱风除湿等功效，是一种临床疗效显著、毒副1.2.3药敏试验用灭菌棉签蘸取供试菌液，均匀涂布于营作用小的广谱抗菌中草药。我们

3、对其不同浓度乙醇提取物的养琼脂平板上，然后用直径6mm的琼脂打孔器均匀打孔，每抑菌作用进行研究，希望为日后的临床用药提供依据。板5孔，去除孔内琼脂并适当封闭孔底。将供试药液加于孔1材料与方法中，中间孔加入双黄莲注射液做对照，其余4孔加千里光提1.1材料取物生理盐水溶液，以满而不溢为宜并作好标记。置4℃冰1.1.1千里光：于秋季采自陕西省周至县后珍子自然保护箱中放置1h后取出并置于37℃恒温箱中培养24h，观察结区，取茎叶，晒干，粉碎，贮存于干燥阴凉处备用。果。判定结果以肉眼观察抑圈直径小于10mm为耐药，1.1.2菌种:大肠杆菌K88、金黄色葡萄球菌ATCC638、蜡1

4、0~15mm为中度敏感，大于15mm为高度敏感。样芽孢杆菌和肺炎链球菌由湛江海洋大学微生物试验室提1.2.4试管稀释法（MIC）取无菌试10支，第1管加3mL供，鼠伤寒沙门氏菌由湛江海洋大学生化中心提供。肉汤，2~9管加2mL肉汤。以无菌操作吸取已稀释的药液1.2方法1mL放进第一支试管中，混匀后吸取2mL加入第2管中，依1.2.1四种浓度乙醇千里光提取液的制备将粉碎后的千次倍比稀释至第8管弃去2mL，在1~8管中各加入已稀释菌里光粉末用过20目筛过滤法去除杂质，称取4份每份各液0.1mL，第9和第10管为对照管，第9支不加药液仅加菌200g放于大烧杯中，分别加入已配好

5、浓度的60%、70%、80%液，第10支仅加2mL药液不加菌液。混匀后，置于37℃培养和90%乙醇各2000mL，做好标记，密封浸泡1h，分别用超声箱培养24h后，观察结果。结果判定以肉眼观察，以药物最小波仪超声波振荡1h，再放入微波炉用中火加热3min，取出后浓度管中无细菌生长者为该试验菌最低抑菌浓度（MIC）。于干燥阴凉处密封浸泡24h；分别用真空抽滤器过滤出残渣，1.2.5最小杀菌浓度测定将MIC测定中未生长细菌的管保留浸出液，各加入50mL无水乙醇于滤液中再过滤一次，内肉汤接种于营养琼脂平板上，做好标记，37℃培养24h，观再分别用pHS-3C型数字酸度计测定p

6、H值，用盐酸和氢氧察并记录结果，以仍无细菌生长的管内的药物浓度，为该药化钠溶液调pH8.0，过滤，滤液再调pH6.0；用旋转蒸发仪的最小杀菌浓度（MBC）。45℃0.75MPa减压回收乙醇，得到4个浓度乙醇提取液，再2结果分别加入1/3体积的乙醚，进行萃取，重复萃取3次，然后放2.1药敏试验结果试验结果表明，千里光60%醇提物对进冰箱4℃下冷藏6h，取出再各过滤一次，进行质量和安全肺炎链球菌呈高度敏感，对其它菌无明显抑菌作用；千里光性检验，然后将提取液放于-46℃的冰箱冰冻12h，用冰冻干70%醇提物对肺炎链球菌呈高度敏感，对其它菌无明显抑菌燥器冰冻干燥48h得冻干粉，

7、再用生理盐水溶解，使之成为作用；千里光80%醇提物对肺炎链球菌呈高度敏感，对其它含生药1g/mL的药液，备用。菌无明显抑菌作用；千里光90%醇提物对肺炎链球菌呈高度1.2.2菌液的制备将5种菌种分别划线接种于平皿培养敏感，对其它菌无明显抑菌作用。基中，置于37℃培养箱中培养18h后，分别挑单个菌落接种2.2试管稀释法测定的抑菌结果从药敏试验中选出肺炎于5mL营养肉汤内，37℃培养18h，取培养菌液1接种环移链球菌为最小抑菌浓度试验的试验菌。肉眼观察各试管内药畜畜牧兽医科技信息牧兽医科技信息2014年第08期21试验研究仔猪圆环病毒和链球菌