小鼠病毒性肝炎模型的建立

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1、动物医学进展，２０１４，３５（１２）：５８－６０ＰｒｏｇｒｅｓｓｉｎＶｅｔｅｒｉｎａｒｙＭｅｄｉｃｉｎｅ小鼠病毒性肝炎模型的建立刘香梅，闵凡贵，贾欢欢，王静，张钰＊（广东省实验动物监测所，广东省实验动物重点实验室广东广州５１０６６３）３．８７５摘要：为了建立病毒性肝炎小鼠模型，将１０ＴＣＩＤ５０／ｍＬ小鼠肝炎病毒Ａ５９（ＭＨＶ－Ａ５９）经腹腔注入封闭群ＮＩＨ小鼠体内，测定小鼠血清ＡＬＴ、ＡＳＴ、ＴＰ、ＡＬＢ含量等指标，并对肝脏组织病理学进行观察。结果表明，小鼠感染ＭＨＶ－Ａ５９后，约３０％存活，肝脏组织呈现持续炎性改变，血清ＡＬＴ、ＡＳＴ升

2、高而ＴＰ、ＡＬＢ有所下降。这些指标与人类病毒性肝炎的临床指标极为相似，可作为病毒性肝炎药物研究的比较理想的动物模型。关键词：小鼠肝炎病毒Ａ５９；ＮＩＨ；病毒性肝炎；动物模型中图分类号：Ｓ８５２．３文献标识码：Ａ文章编号：１００７－５０３８（２０１４）１２－００５８－０３病毒性肝炎尤其是乙型病毒肝炎是一种严重危１．２方法害人类健康的常见病，多发病。由于乙型肝炎病毒１．２．１模型的建立及评价将稀释后的细胞毒按（ＨＢＶ）是一种种属特异性和组织特异性极强的照０．２ｍＬ／只的剂量腹腔接种ＮＩＨ小鼠，接毒后，ＤＮＡ病毒，通常只感染人和高等非人灵长类动物

3、，将动物随机分成２组：第１组２０只，进行临床观察不感染医学中常用的哺乳类实验动物，同时很难感和生存分析；第２组３０只，用于样本的采集，分别在染体外培养的细胞，从而导致基于ＨＢＶ的病毒性感染后０、３、５、７、１０、１４ｄ各取３只存活动物实施安肝炎模型缺乏。目前，虽然建立了大量的肝炎动物乐死，收集血液和组织样本，血液样本离心后收集血模型，如鸭乙肝模型、土拨鼠乙肝模型、ＨＢＶ感染黑清，置－８０℃保存，用于肝功指标的测定，组织样本猩猩以及ＨＢＶ转基因小鼠模型、自身免疫性肝炎采用１００ｍＬ／Ｌ福尔马林固定，石蜡包埋、切片，ＨＥ［１－９］小鼠动物实验模

4、型等，但仍存在不同程度的缺染色。评价标准：病毒在肝脏内复制并出现明显的［１０］陷。理想的肝炎动物模型应可以高度模拟乙型肝炎炎症和坏死病变病毒自然发病历程，这也是当前研究人员努力的目１．２．２统计分析试验数据采用Ｅｘｃｅｌ录入和标。本研究采用小鼠肝炎病毒Ａ５９（ＭＨＶ－Ａ５９）感ＳＰＳＳ１１．０进行统计分析。统计结果采用ｘ珚±ＳＤ表染ＮＩＨ小鼠，以建立具有病毒感染过程的病毒性肝示，观察指标的动态变化差异采用单因素分析炎模型。（ＡＮＯＶＡ），组间差异采用ｔ检验。Ｐ＜０．０５表示差１材料与方法异显著，Ｐ＜０．０１表示差异极显著。１．１材料２结果１

5、．１．１实验动物ＳＰＦ级ＮＩＨ小鼠，雌性，５０只，２．１临床观察６周龄～８周龄，购自广东省医学实验动物中心，质接毒后第４天小鼠打堆，被毛粗乱、无光泽，眼量合格证编号：００８２０５７，本试验在广东省实验动物角有分泌物，体温降低，摄食减少；第５天小鼠开始监测所负压感染实验室进行，实验动物使用许可证出现死亡，并迅速进入死亡高峰期（第５～第６天），号：ＳＹＸＫ（粤）２００９－００１９。总体死亡率达７０％（图１）；接毒１０ｄ后，动物摄食逐１．１．２ＭＨＶ病毒小鼠肝炎病毒Ａ５９毒株渐恢复正常，精神状态基本恢复正常。（ＭＨＶ－Ａ５９），购自ＡＴＣＣ，毒株

6、号为ＶＲ－７６４，利用２．２病理学检查－５．８７５Ｌ９２９细胞有效扩增并保存，病毒效价为１０２．２．１肉眼观察肉眼观察肝脏病变，接毒当天ＴＣＩＤ５０／ｍＬ。将细胞毒１∶１００稀释备用。（０ｄ），小鼠肝脏表面光滑、圆润，色泽明亮（图２Ａ）；收稿日期：２０１４－０４－２８基金项目：广东省科技基础条件建设项目（２０１１Ｂ０６０３０００３３）作者简介：刘香梅（１９８１－），女，助理研究员，大学，主要从事实验动物微生物学研究。＊通讯作者刘香梅等：小鼠病毒性肝炎模型的建立５９第３天，小鼠肝脏肿大，色泽暗红，边缘钝圆，质地变析结果显示，随着感染时间的延长

7、，测定的４项指标脆，且出现白色点状坏死灶；第５天，肝脏表面出现均出现显著性变化（Ｐ＜０．０１），其中血清谷丙转氨弥漫性针尖样坏死灶，死亡动物肝脏（图２Ｂ）由于淤酶（ＡＬＴ）和谷草转氨酶（ＡＳＴ）水平动态变化一致，血颜色较存活动物（图２Ｃ）深；第１４天，小鼠肝脏色表现为先升高后降低，高峰值出现在５ｄ～７ｄ，总蛋泽基本正常，表面仍可见针尖样坏死灶。白（ＴＰ）与白蛋白（ＡＬＢ）则出现先降低再升高的趋２．２．２组织病理学观察接毒当天（０ｄ）小鼠肝组势，低峰值也出现在５ｄ～７ｄ。将测定结果进一步织未见异常变化（图３Ａ）；小鼠感染３ｄ后，肝脏开与接毒当

8、天结果进行比较，４项指标的第３、５、７天始出现病变，主要表现为肝细胞的弥散性肿胀、水样结果均与接毒当天结果存在极显著差异（Ｐ＜变性和少量细胞的坏死（图３Ｂ）；第５天，肝组织出０．