运用基因枪法进行蛹虫草遗传转化的研究

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1、园艺学报，2015，42(9)：1837–1842.ActaHorticulturaeSinicadoi：10.16420/j.issn.0513-353x.2015-0145；http：//www.ahs.ac.cn1837运用基因枪法进行蛹虫草遗传转化的研究****茅文俊，鲍大鹏，周陈力，李燕，谭琦，汪滢（国家食用菌工程技术研究中心，农业部南方食用菌资源利用重点实验室，上海市农业遗传育种重点实验室，上海市农业科学院食用菌研究所，上海201403）摘要：采用蛹虫草[Cordycepsmilitaris（L.）Link]野生型菌株CM01为供试材料，以金粉

2、包裹质粒pDHt-gpdA-GFP-bar，运用基因枪法转化，经草铵膦抗性筛选，最终在靶距离6cm或9cm，氦气压力66-17.58×10Pa或8.96×10Pa条件下，获得2个遗传稳定的转化子Gfp2与Gfp3，转化效率为0.4cfu·µg。PCR鉴定与Southern杂交分析显示，草铵膦抗性基因Bar已经以单拷贝或者多拷贝方式整合到蛹虫草转化子的基因组中。蛹虫草转化子的菌丝在荧光显微镜下可以观测到绿色荧光，表明载体携带的绿色荧光蛋白基因在蛹虫草转化子中得到表达。研究结果表明可以把基因枪法应用于真菌蛹虫草，建立了一种简便有效的遗传转化方法，而转化效率需要

3、通过优化基因枪参数设置、受体材料制备等途径进一步提高。关键词：蛹虫草；基因枪；遗传转化；绿色荧光蛋白中图分类号：S567；S646文献标志码：A文章编号：0513-353X（2015）09-1837-06EffectiveTransformationofCordycepsmilitarisbyParticleBombardment****MAOWen-jun，BAODa-peng，ZHOUChen-li，LIYan，TANQi，andWANGYing（InstituteofEdibleFungi，ShanghaiAcademyofAgriculturalS

4、ciences，KeyLaboratoryofEdibleFungiResourcesandUtilization（South），MinistryofAgriculture，P.R.，China，NationalEngineeringResearchCenterofEdibleFungi，KeyLaboratoryofAgriculturalGeneticsandBreedingofShanghai，Shanghai201403，China）Abstract：AneffectiveandconvenienttransformationmethodofCor

5、dycepsmilitariswereestablishedbymeansofparticlebombardment.CoatingmicrocarrierswithplasmidpDHt-gpdA-GFP-bar，wetransferredC.militarisCM01byparticlebombardment.Afterbeingselectedbyglufosinate-ammonium，twotransformantswereobtainedunderthreeconditionsdifferinginthetwoparametersoftarge

6、tdistance66（6cmor9cm）andheliumpressure（7.58×10Paor8.96×10Pa）.Thetransformationfrequencywas-10.4cfu·µg.PCRandsouthernblotresultsindicatedthattheselectivemarkergeneBarwasintegratedintothegenomicDNA，asinglecopyormultiplecopiesintegration，andgeneticallystable.GreenfluorescenceoftheC.m

7、ilitaristransformantmyceliacouldbeobservedunderfluorescentmicroscope，whichindicatedthattheexpressionofgreenfluorescentproteinwassuccessfulintheC.militaristransformants.TransformationbyparticlebombardmentenrichedthetransformationmethodsofC.militaris.However，samplepreparationandpara

8、metersettingneedtobeoptimized，ino