不同程度的溶血对elisa检测hbsab的影响

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1、不同程度的溶血对ELISA检测HBsAb的影响【摘要】目的探讨不同程度的溶血标本对ELISA检测HBsAb结果的影响。方法分别用已知HBsAb阴性的血标本，人为造成不同程度的溶血，同时用酶联免疫吸附试验进行HBsAb的检测；测定其OD值，通过对检验结果的观察，分析溶血标本对酶联免疫吸附试验检测的干扰程度。结果以标本的OD值≧1为阳性进行结果判读。结果当样本中游离血红蛋白≧8g/L时，对酶联免疫吸附试验检测有明显的影响，可造成结果假阳性。结论用酶联免疫吸附试验进行HBsAb检测时，如样本游离血红蛋白≧8g/L时，要重新取样进行复查。【关

2、键词】ELISA溶血标本酶联免疫吸附试验（ELISA)自1971年问世以来，以敏感性高、特异性强、操作简便、安全等特点已被临床广泛使用，是最常用的乙肝病毒标志物的检测技术。BBsAb阳性时机体获得乙肝病毒免疫力的标志[1]，是观察是否接种上乙肝疫苗的首要指标。ELISA法检测要求样本不使用高血红蛋白的样本，不能溶血，但在实际工作中由于穿刺、离心或病人血难抽等因素，常产生不同程度的溶血标本，这对检测结果会产生一定的影响。本实验通过人为造成标本不同程度的溶血，观察对ELISA法检测HBsAb结果的影响，现报告如下。1材料与方法1.1对象标

3、本来自本院健康体检者182例，均为HBsAb阴性者，其中男性102人，女性80人。1.2试剂中生生物有限公司生产，批号为：20101002，质控血清是中生生物有限公司生产，批号为：20101002。1.3仪器与设备酶标仪为迈瑞MR-96，CD-1700血球计数仪。1.4方法早晨空腹抽取静脉血4毫升，用震荡方式造成不同程度的溶血，溶血程度以血浆游离血红蛋白（FHb）为计。游离血红蛋白用CD-1700血球计数仪测定，HBsAb用ELISA进行检测，按要求进行严格质控。2结果已知HBsAb阴性标本在不同程度溶血对结果影响见表1。表1不同程度

4、溶血标本的HBsAb德检测结果FHb例数HBsAb阴性HBsAb假阳性12525042626062323082321210241952022121030200204019019在FHb≧8g/L时，有假阳性发生3讨论溶血是临床检验中最常见的一种干扰和影响因素。溶血可分为体内溶血和体外溶血[2]。体内溶血可由物理因素（如人工心脏瓣膜或大血管手术后）、化学因素（如恶性疟）和药物毒性反应等因素引起。体外溶血可由物理因素（抽血时负压过大、水浴温度过高、冰冻、振荡等机械性破坏）、化学因素（血样接触表面活性剂）和代谢因素（如遗传病引起红细胞脆性增

5、加）引起。在临床上常见的引起标本溶血的原因包括[3]:由于病人严重脱水、低血容量休克等原因导致穿刺困难造成的溶血;由于抽血器具质量不合格如真空管负压不够或塑料试管质量较差导致的溶血;用干燥管采血为了尽快分离血清用竹签搅拌不当引起的溶血等。溶血造成红细胞破坏,胞内血红蛋白等物质和细胞内液进入血清,对ELISA的影响主要是溶血血清中的血红蛋白的非特异性吸附和溶血时细胞内液对血清的稀释作用[4]。ELISA反应原理基础是抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记，结合在固相载体表面的抗原或抗体仍保持其免疫活性，酶标记的抗原或抗体即保留其免疫学活

6、性，又保留酶的活性。在测定时，受检标本与固相载体表面的抗原或抗体起反应，用洗涤的方法使固相载体上形成抗原抗体复合物与液体中的其他物质分开,再加入酶标记的抗原或抗体,也通过反应而结合在固相载体上。此时固相上的酶量与标本中受检物质的量呈一定比例。加入酶反应的底物后,底物被酶催化成有色产物,产物的量与标本中受检物质的量直接相关。可根据程色的深浅进行定量或定性分析。由于酶的催化效率很高,间接放大了免疫反应的结果,使测定方法达到很高的敏感度。临床实验中用ELISA法检测HBsAb，其主要酶为辣根过氧化物酶，而Hb中具有类过氧化物酶活性，其作用与

7、辣根过氧化物酶相似，均能催化底物成为有色产物。当样本溶血时，红细胞破裂，释放出Hb，如果反应孔因非特异性吸附血红蛋白而残留,则类过氧化物酶与底物发生反应使本底OD值升高,甚至造成检测结果假阳性。如果反应板孔包被、洗涤、封闭等质量好，操作正规，则可能大大减少或排除非特异性吸附的干扰[5]。在本实验中，当HB8g/L时，结果无影响，这可能因为红细胞破坏较少，释放出的类过氧化物酶较少的缘故，随着FHb的增高，8g/LFHb40g/L时，类过氧化物酶逐步增多导致假阳性的发生。HBsAb对乙肝病毒侵袭具有免疫力，被认为是保护性抗体，是疾病恢复、

8、预后良好的血清学标志。在临床治疗和预防接种中起有十分重要的作用。我们在进行HBsAb检测时，要注意样本外观，虽然溶血会对HBsAb造成假阳性的影响，但对轻微溶血样本（FHb8g/L），可发报告，以免重新抽血给病人造成痛苦