溶血对ELISA方法检测HIV抗体的影响.pdf

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1、中国卫生检验杂志2008年10月第18卷第l0期ChineseJoumMofHealtIlLab0raIoryIkhn0l。科，Oct2008；Vol18No102161【经验交流】溶血对ELISA方法检测HIV抗体的影响张利泉，杨杰，孟淑欣(山东省蓬莱市卫生防疫站，山东蓬莱~5600)[关键词]ELISA；溶血；HIV；检测[中图分类号】R446．6[文献标识码】C[文章编号】1004—8685(2~8)10—2161-02酶联免疫吸附试验(ELISA)因其敏感性高、特异性强、操1．3统计学处理作简便、重复性好而且不需要昂贵的仪器而得到广泛使用，用S~S15．0进行

2、双因素统计学分析，计算溶血程度和溶《全国艾滋病检测技术规范》规定EMSA方法为艾滋病筛查实血标本保存时间长短的P值，P<0．05为具有统计学意义，即验室进行初筛试验的标准方法。在日常工作中经常会遇到溶影响EHSA试验对HIV—Ab的检测结果。血标本，标本溶血后会释放出血红蛋白，血红蛋白中的亚铁血红素具有过氧化物酶样作用，可能造成试验的假阳性，本文就2结果溶血对EMSA方法检测HIV抗体的影响进行分析⋯。每种试剂(A、B)检测结果的阳转率(阴性转为阳性)如表I、2，①A试剂：除了>looHbg／L外其他的溶血程度都出现了1材料和方法不同数量阳转的情况，不同的保存时问也都

3、出现了阳转的情1．1材料况；②B试剂：不管是在不同的溶血程度还是在'不同的保存时1．1．1标本间上都出现了一定的阳转情况。1．1．1．1标本采集：收集食品从业人员正常健康查体为乙肝、应用双因素方差进行统计学分析如表3、4(a因素代表不丙肝等阴性且实验过程中没有出现过假阳性的非溶血标本，同的溶血程度，b因素代表不同的保存时间)，①A试剂：a因目的是排除实验过程中能够引起EHSA方法假阳性的其他非素的P=0．250>0．05，b因素的P：0．250>0．05；②B试剂：a溶血因素。因素的P=0．826>0．05，b因素的P=0．510>0．05。1．1．1．2溶血标本的制

4、备：将收集的标本进行一次HIV—Ab初筛，选择初筛为阴性的标本(排除HIV阳性标本和进一步排表1试剂A检测阳转率(％)除实验过程中能够引起ELISA方法假阳性的其他非溶血因素)。以物理震荡和反复冻融等物理方法造成不同程度的溶血，然后分离血清和血细胞以保证溶血程度的稳定防止进一步溶血，以氰化高铁法测得血红蛋白的浓度用以表示溶血的程度，以16Hbg／L和l0oHbg／L为界分为3组，并且按照溶血后保存时间的长短分为3组，共9组，每组70份J。1．1．2试剂选择全国排名前六位、批检合格、在有效期内并且明确标明使用辣根过氧化物酶作为标记物的A、B二种试剂。1．1．3仪器美国S

5、TATFAX2600酶标洗板机、美国STATFAX2100全自动酶标仪，仪器均经过计量技术监督局检定合格，符合《全国艾滋病检测技术规范》要求。1．2方法1．2．1操作方法严格按照试剂盒使用说明书进行操作，试验设阳性对照2孑L，阴性对照3孔，外部质量控制2孔，每份样品每次试验做两孔。1．2．2结果判断按照试剂盒使用说明书的要求进行双波长a2．6672l_3332．O0o．250检测，两孔OD值均大于Cut—ofr值判定检测结果为阳性，两b2．66721．3332．000．250孔OD值均小于Cut一值判定检测结果为阴性，一孔OD值大于Cut一值一孔OD值小于Cut一0Ⅱ

6、值则判定为无效，目的是为了排除实验过程中操作原因引起的假阳性。[作者简介]张利泉(1979一)，男，本科，技师，主要从事艾滋病检测工作。2162中网卫生榆验杂志2008年10月第l8卷第lO期ChineseJoumMofHeathLaborato~Teehndogy，Oct2008；Vol18No103讨论高，如果在此时合并其他影响因素很有可能会使得标本的OD随着技术的进步，ELISA试剂盒的敏感性和特异性都有了值超过Cut—of值，导致试验结果的假阳性J。根据《全国艾显著的提高，但是实验原理、试验条件及操作人员等因素都会滋病检测技术规范》，如果试验中出现阳性，阳性标

7、本要送艾对检测结果产生影响。如表3、4所示对A、B两种试剂的检测滋病检测确认实验室进行确认，这必然造成人力物力的浪费，结果进行双因素方差分析，两种试剂两种因素的P值均>因此我们在采血和血液标本的运输过程中应当避免标本溶0．05无统计意义，也就是说理论上不同的溶血程度和溶血标血，但是日常工作中溶血标本是不可能完全避免的，因此实验本保存不同的时间对ELISA方法的实验结果是不会产生影响室接到溶血标本之后，应当尽快分离血清，防止溶血的进一步的。但是如表l、2所示，不同的溶血程度下A、B两种试剂都加重。对溶血标本的检测，建议采取两孔平行试验，如果试验出现了极