gdcl3对小鼠肝脏再生早期cyp7a1基因转录的影响

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1、GdCl3对小鼠肝脏再生早期Cyp7A1基因转录的影响：黄雄飞，陈良万，黄文栋【摘要】　　目的：探讨小鼠肝脏再生早期氯化钆(GdCl3)通过作用于枯否细胞影响胆酸介导的Cyp7A1基因转录的抑制.方法：运用GdCl3(10mg/kg,iv.)或PBS(0.2mL,iv.)处理C57BL/6小鼠24h后，切除小鼠70%的肝脏，于术后第1日处死小鼠，收集肝脏，采用实时定量RTPCR方法检测肝脏中Cyp7A1,TNFα和IL6基因的表达.结果：肝脏再生的第1日,与PBS对照组相比,GdCl3处理组中Cyp7A1mRNA的表达降低(P

2、<0.01),而细胞因子TNFα和IL6mRNA的表达升高(P<0.01).结论：在肝脏再生的早期,GdCl3可增进胆酸介导Cyp7A1基因转录的抑制,这种作用是通过促使枯否细胞产生细胞因子TNFα和IL6来实现.【关键词】GdCl3；枯否细胞；细胞因子类；Cyp7A1基因；肝再生　　EffectofgadoliniumchlorideonCyp7A1genetranscriptionduringearlystagesofmouseliverregeneration【Abstract】AIM:Toobserveth

3、eeffectofgadoliniumchloride(GdCl3)onKupffercellsregardingthebileacidmediatedsuppressionofCyp7A1genetranscriptionduringearlystagesofthemouseliverregeneration.METHODS:Ty,C57BL/6miceg/kg,iv)orPBS(0.2mL,iv).MiceeasuredbyrealtimeRTPCR.RESULTS:Duringthefirstdayofliverreg

4、eneration,paredtothePBSpretreatedmice,theCyp7A1geneexpressionaticallydecreased(P<0.01).Incontrast,theTNFαandIL6geneexpressionsice(P<0.01).CONCLUSION:Duringtheearlystagesofliverregeneration,theenhancedeffectofthebileacidmediatedsuppressionofCyp7A1genetranscript

5、ionbyGdCl3isviaitsstimulationofcytokineproductionfromKupffercells.【Keyy,PH)后正常再生的重要条件.氯化钆(gadoliniumchloride,GdCl3)是一种稀有的地球金属，它可以破坏肝脏枯否细胞的功能，因此常被用来研究与枯否细胞相关的疾病或毒性过程的发生机制.GdCl3的作用效应目前还有争议.本研究探讨在小鼠70%PH术后再生的早期，GdCl3影响枯否细胞参与胆酸负反馈抑制Cyp7A1基因表达的过程.1材料和方法1.1材料雄性，出生8~10a公司)；M

6、MLV逆转录酶(美国Invitrogen公司)；重组核糖核酸酶抑制剂(美国Promega公司)；SYBRGreenPCRMasterMix，7300实时定量PCR系统(美国AppliedBiosystems公司)；PolytronPTMR2100匀浆器(美国Lyophiler/polytron)；CS6R低温离心机，640B分光光度计(美国Beckman).1.2方法1.2.1动物实验实验动物随机分为未行手术而仅给予PBS静注组（A组)，70%PH术后GdCl3处理组（B组）和70%PH术后PBS对照组(C组)三组,每组动物

7、各12只.A组仅给予小鼠尾静脉注射PBS0.2mL；B,C两组分别于70%PH术前24h,小鼠尾静脉注射GdCl310mg/kg或注射PBS0.2mL.行70%PH手术的小鼠,其肝脏的左外叶，尾叶和中叶将被完全切除，胆囊保持完整无损.于术后第1日，将三组小鼠全部处死，收取肝脏，在液氮中速冻后保存于-80℃冰箱备用.1.2.2小鼠肝脏总RNA的抽提和cDNA的合成取100mg肝脏组织，在TRI试剂中匀浆后，根据说明书的方法进行RNA抽提.取3μgRNA，以oligodT为引物,在20μL反应体系65℃预变性10min后,再加入5xF

8、SBuffer，0.1mmol/LDTT,25mmol/LdNTP,Rnasin和MMLV至反应体系30μL,42℃1h.1.2.3实时定量PCR应用7300SYBRGreen实时定量PCR系统定量检测小鼠肝脏中Cyp7A1,TNFα和IL6基因