忍冬藤叶中绿原酸的分离纯化工艺研究

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1、忍冬藤叶中绿原酸的分离纯化工艺研究【摘要】目的研究忍冬藤叶中的绿原酸分离纯化工艺。方法用静态吸附法考察不同大孔树脂的吸附、解吸性能，并以绿原酸保留率为指标，采用L9(34)正交实验设计对忍冬藤叶中绿原酸的分离纯化工艺条件进行优化。结果综合考虑，最佳大孔树脂为LSA-21，溶媒浓度为25％，溶媒为2BV，洗脱流速为0.6BV·h-1。结论该工艺合理，稳定可行，可用于工业化推广。【关键词】忍冬藤叶；分离纯化工艺；大孔吸附树脂；正交实验设计；绿原酸Abstract：ObjectiveTostudythepurificationof

2、Chlorogenicacidintacroporousresinpropertiesofabsorptionanddesorptionethod.ance,andtheoptimumconditionsasfolloountofsolution，theflo，4.6mm×250mm;大连依利特）；柱温35℃；流动相为乙腈-0.4％磷酸（13∶87）；检测波长327nm；流速1.0ml·min-1；理论塔板数按绿原酸峰计算应不低于1000。2.1.2对照品溶液的制备精密称取绿原酸对照品17.80mg，置25ml棕色量瓶中，加

3、50%甲醇溶液溶解并稀释至刻度，摇匀；精密量取1ml，置10ml棕色量瓶中加50%甲醇稀释至刻度，摇匀，贮存于棕色量瓶并置4℃冰箱，备用。2.1.3标准曲线的绘制分别精密量取绿原酸对照品溶液1，2，3，4，5，6ml置10ml容量瓶中，加50％甲醇稀释至刻度，依次精密吸取20μl注入液相色谱仪，记录色谱图。以进样量（X）对峰面积A作线性回归，回归方程为：A=1.5659×106X+8319.3,r=0.9999，可知绿原酸在0.2236～1.3416μg范围内与峰面积呈良好线性关系。2.1.4原药材含量测定取样品适量，粉碎成

4、粗粉，分别称取3份各0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入50％甲醇50ml，称定重量，超声30min，放冷，再称定重量，用50％甲醇补足减失重量，摇匀，0.45μm微孔滤膜滤过，精密吸取对照品溶液与样品滤液各20μl，注入液相色谱仪，记录色谱图。用外标法，以峰面积计算样品中绿原酸的含量，结果平均含量按质量分数计为18.40mg·g-1。2.2上柱前样品溶液的制备取忍冬藤叶粗粉1kg，以流速为12ml·kg-1·min-1，溶媒为40％乙醇渗漉，收得8倍量渗漉液,回收乙醇，精密测定残留液体积并依法测定绿原酸含量，备用。

5、2.3不同型号的大孔吸附树脂对绿原酸吸附、解吸能力的比较称取10g预处理好的大孔吸附树脂置于100ml锥形瓶中，加入一定量提取液，浸渍24h，不时振摇，依法测定含量，并根据公式(1)［3］计算吸附量及吸附率。在吸附饱和的10g树脂中，加入50ml90%乙醇，不断振摇，依法测定含量，根据公式(2)［3］计算解吸量和解吸率。结果见表1。Qa＝(Co-Ce)×V/g·ml-1)；C0-吸附液起始浓度(mg·ml-1)；Ce-吸附液平衡浓度(mg·ml-1)；V-溶液体积(ml)；g·ml-1)；Qd一解吸量(mg·ml-1；Ed-

6、解吸率（％）表1大孔吸附树脂对绿源酸吸附、解吸附能力比较结果表明，LSA-21吸附量与解吸量最大，LSA-80与HPD-100A吸附量也较大，但解吸量稍低于LSA-21，以吸附量和解吸量为参考指标，综合考虑最佳大孔吸附树脂为LSA-21。2.4优化分离纯化工艺参数2.4.1正交实验设计为优化分离、纯化工艺参数，在预实验的基础上，采用L9（34）正交实验设计，以绿原酸保留率为指标，考察乙醇浓度、收集量、洗脱流速对LSA-21分离、纯化效果的影响。因素与水平见表2。表2因素水平水平A乙醇浓度（%)B收集量/BVC洗脱流速/BV·

7、h-112510.423520.634530.82.4.2实验安排及结果取已处理好的大孔树脂装柱，依生产企业实际生产情况，固定大孔吸附树脂柱径高比为1∶4。分别取忍冬藤叶渗漉液9份各80ml，上样，均先用1BV蒸馏水洗脱，固定水洗脱流速0.8BV·h-1，水洗脱液另存；然后依L9（34）正交实验设计安排表进行实验，收集醇洗脱液，摇匀，精确测定体积，依法测定绿原酸含量并计算保留率（％）。结果见表3，方差分析见表4。由表3～4可知，对绿原酸保留率的影响因素依次是B＞C＞A，其中因素B有显著性影响，最佳工艺条件为A3B3C2。考虑

8、到A1与A3、B2与B3水平对绿原酸保留率影响相近，本着降低成本的原则，确定优化工艺为A1B2C2，即溶媒为25％乙醇，收集洗脱液2BV，洗脱流速为0.6BV·h-1。表3正交实验安排及结果表4正交实验方差分析2.5验证实验为进一步考察上述最佳工艺的稳定性和合理性，按该工艺条件进行重复性实