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1、苦参总黄酮体内外抗肿瘤作用实验研究作者：孙明瑜,左剑,段继峰,韩军,范士明,张炜,朱丽芳,姚明辉【关键词】苦参;黄酮类;抗肿瘤药;小鼠Objective:Toexploretheantitumoractivitiesofkushen(Sophoraflavescens)flavonoids(KS-Fs)invivoandinvitro.Methods:Cellproliferationethylthiazolyltetrazolium(MTT)method.H22hepatocellularca
2、rcinomaandS180saraice.Leaice.H460andEca-109tumoricebyinjecting5×105or5×106tumorcellsintherightflank,respectively.Results:KS-Fscouldinhibitthegroantumorcelllines(A549,SPC-A-1,NCI-H460,etc.)invitro.TheantitumorefficaciesedinthemicemodelsofH22,S180andLe
3、orsandthenudemicemodelsofhumanH460andEca-109xenograftedtumors.TheoralorintravenousmaximumtolerateddoseofKS-Fsorethan2.8g/kgor750mg/kgrespectively,farmorethantheoralmediallethaldoseofkushenalkaloids(≤1.18g/kg).Noadversereactionsaybedevelopedasanovelan
4、titumoragent.Keyice苦参（SophoraflavescensAiton）为豆科槐属植物，是中国传统常用中药之一，始载于《神农本草经》，列为中品，常用于治疗急、慢性炎症和癌症等疾病。苦参主要含有生物碱和黄酮两大类化学成分［1］。1992年以苦参碱和氧化苦参碱为主的苦参总碱注射液吗特灵［（92）卫药试字X-10（2）号］已作为抗肿瘤药批准上市。相对于苦参碱，苦参黄酮的研究较迟。现已从苦参根中分离出56种黄酮类化合物，其中大部分化合物的A环上存在异戊烯基侧链［2-14］。研究表明异戊
5、烯基侧链黄酮有抗病原微生物、抗炎、抗肿瘤（体外）等生物活性［2-14］。一系列从苦参中分离出的含异戊烯基侧链的苦参黄酮在体外对一些人肿瘤细胞株有细胞毒活性，例如人白血病HL-60［2］、K562，小鼠白血病L1210［10］，人乳腺癌MCF-7［11］，非小细胞肺腺癌A549，卵巢癌SKOV-3［12］、1A9［9］，皮肤黑素瘤SK-MEL-2，中枢神经系统肿瘤XF498，肠癌HCT［12］，子宫颈癌HeLa［10］，鼻咽上皮癌KB，KB-Vin（drug-resistantvariantKB）
6、等细胞株［10］。这些黄酮还可以抑制一些酶的活性，例如phospholipaseCγ1［7］，diacylglycerolacyltransferase［9，13］，tyrosinase［5，14］，testosterone5α-reductase［6］，cGMPphosphodiesterase5［8］。但苦参黄酮在体内是否有抑制肿瘤作用，目前国内外均没有相关报道。本研究提取分离苦参总黄酮（kushenflavonoids,KS-Fs）和苦参酮（kurarinone,Kur），检测KS-Fs和
7、Kur对肿瘤细胞增殖的影响，并比较KS-Fs与市售苦参碱（kushenalkaloids,KS-As）制剂（主要成分为苦参生物碱或氧化苦参碱）的细胞毒作用。考察KS-Fs和Kur对小鼠S180肉瘤、H22肝癌和Leethylsulfoxide,DMSO）配制成20mg/ml储备液，－20℃贮存，临用时用相应细胞培养液稀释到所需终浓度。体内药效实验：将KS-Fs和Kur用5%DMSO和9%CremophorEL助溶后，加85%蒸馏水配成溶液。急性毒性实验注射配方：用10%DMSO和18%Cremo
8、phorEL溶解到最大浓度，加蒸馏水配成终浓度为50mg/ml溶液。急性毒性实验口服配方：20%聚乙二醇（PEG400），18%Cremophor溶解到最大浓度，加蒸馏水配制成混悬液，终浓度为70mg/ml。注射用环磷酰胺（cytoxan,CTX），江苏恒瑞医药股份有限公司，批号为04061821；注射用顺铂（cisplatin），齐鲁制药有限公司，批号为04051241；临用时用生理盐水稀释。1.1.2细胞株肺癌A549、SPC-A-1、NCI-H460（H460）、H446，人乳腺癌MDA-
