正柴胡饮体外抗甲型流感病毒和乙型流感病毒作用的研究

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1、正柴胡饮体外抗甲型流感病毒和乙型流感病毒作用的研究作者：赵萍，刘安平，刘妮，李青雅【摘要】为探讨中药复方正柴胡饮（柴胡、陈皮、防风、芍药、甘草、生姜等）的抗病毒作用，从体外抗病毒实验对其抑制甲型流感病毒（FM1）和乙型流感病毒（昆科70B）的作用进行了研究。结果显示：中药复方正柴胡饮在无毒浓度1.56g／L、6.25g／L分别对FM1、昆科70B有明显的抑制病毒致细胞病变作用。【关键词】感冒／中药疗法；甲型流感病毒；乙型流感病毒；正粘病毒／药物作用　　流行型感冒是由流感病毒引起的急性传染病，以其病原的易变性和

2、疾病的传播速度快而著称。临床特征为呼吸道症状较轻而发热、全身酸痛、乏力等中毒症状较重。对老年人、儿童和有潜在健康问题的人有合并并发症甚至致命的危险，但目前合成药中尚无理想的能消除症状的抗病毒药物问世［1］。古方正柴胡饮，由明代著名医家张介宾所创，对外感风寒诸疾颇具疗效。为研究其对流感病毒的抑制作用，我们选择了甲型流感病毒(FM1)和乙型流感病毒(昆科70B)两种流感病毒进行了体外抗病毒作用的实验研究。　　1材料与方法　　1.1实验材料　　1.1.1药物正柴胡饮全方六味(柴胡、陈皮、防风、芍药、甘草、生姜等)。

3、实验用药均经生药鉴定并按原方比例水煎浓缩，由本所实验室制备。阳性对照药物三氮唑核苷(病毒唑)，由湖北省医工所提供，批号010804。　　1.1.2毒种　　1.1.2.1FM1由中国医学科学院医药生物技术研究所提供，于狗肾细胞株(MDCK)狗肾细胞传代，以病变鸡红血球血凝法来判断其滴度，在35℃、5％CO2培养箱培养。　　1.1.2.2昆科70B由昆明医学研究所提供，于MDCK狗肾细胞传代，以病变及鸡红血球血凝法来判断其滴度，在35℃，5％CO2培养箱培养。　　1.1.3细胞MDCK引自广州市儿童医院病毒室。　

4、　1.1.4细胞培养液和维持液各为含10％、2％小牛血清，100kU／L青霉素，链霉素的DMEM(GIBCOBRI，公司产品)。　　1.2方法抗病毒实验在96孔微量板上进行，每孔0.1ml，细胞数为3×104个，长成单层后，将药液用维持液稀释成不同浓度，抛掉原培养液后将不同浓度的药液加入细胞孔中，0.1ml／孔，以细胞不出现病变的最小稀释度为该药液对细胞的无毒界限。通过毒性试验观察到正柴胡饮药液6.25g／L和病毒唑1g／L浓度对细胞生长无明显影响，同时在相应敏感细胞上测定攻击病毒之TCID50。实验时设病毒

5、对照、细胞对照、药物毒性对照及三氮唑核苷(病毒唑)对照，置37℃CO2培养箱内，每天在倒置显微镜下观察病变并记录。当病毒对照孔细胞出现+++病变时，继续观察4d则终止。细胞出现病变的程度按以下6级标准记录：细胞生长正常，无病变出现；细胞病变少于整个单层细胞的10％；细胞病变约占整个单层细胞的25％；细胞病变约占整个单层细胞的50％；细胞病变约占整个单层细胞的75％；细胞病变约占整个单层细胞的75％以上。　　2结果　　表1结果表明：正柴胡饮煎剂在1.56g／L浓度下，对FM1有较好的抑制病变作用，在6.25g／

6、L浓度下对昆科70B有较好的抑制病变作用。阳性药病毒唑25μg/ml时能完全抑制病毒所致病变。该实验重复2次，结果与表1完全一致。　　表1正柴胡饮在MDCK上对病毒致病变抑制作用（略）　　注：+表示不抑制；-表示抑制。　　3讨论　　流感在现代医学认为，是由病毒引起，病毒感染首先入侵鼻咽、口咽、喉部等呼吸道的纤毛柱状上皮细胞内进行复制，借神经氨酸酶的作用而释出，再侵入其他柱状上皮细胞引起变性、坏死、脱落，从而引起感冒症状。每年全球约有10％的人口即6亿人患流行性感冒，我国被国际上公认是流感的多发地。自1957年

7、以来3次流感大流行均首发于我国，且在香港地区和内地分别发现了禽H5N1和H9N2亚型毒株能感染人［2］，严重危胁人类健康。目前西方和国内临床用于抗流感病毒的药物有金刚烷胺(amatadine)、甲基金刚烷胺(rimantadine)、病毒唑(Virazole)等，前二者可引起中枢性眩晕和迅速耐药毒株的出现［1］，而低剂量口服病毒唑1.0g/d无明显抗病毒作用，大剂量口服对无并发症流感患者退热与症状消除的作用较快［3］，但大剂量口服的毒性较大，且对乙型流感无治疗作用。祖国传统医学中用中草药治疗流感历史悠久。流感

8、，在祖国医学属风寒伤于足太阳经，即时病的范畴。现代的体外实验也证实了中草药的抗病毒作用。中药复方正柴胡饮引自古方，清热解毒，解热镇痛，亦有对病毒的抑制作用。我们的实验显示：正柴胡饮在无毒浓度1.56g／L下在体外对FM1有较好的抑制作用，在无毒浓度6.25g／L下在体外对昆科70B有较好的抑制作用。此次实验采用效果确切的抗病毒药物病毒唑做阳性药物，与正柴胡饮进行对照，实验结果确实可信，我们将在此基础